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Ataluren（又名PTC124,商品名Translarna）,化学名3-（（5-（2-氟苯基））-3-（1,2,4-噁二唑基））-苯甲酸,是由美国PTC公司研发的治疗无义突变的杜氏肌营养不良（Duchenne型肌营养不良和Becker型肌营养不良）及囊肿性纤维化的小分子口服药物,目前已在欧洲上市,美国处于Ⅲ期临床研究阶段。在mRNA翻译过程中,能够使核糖体,越过mRNA上过早出现的终止密码子,继续阅读正常的遗传信息,合成完全的有功能的蛋白质。第一部分Ataluren的合成目的:建立Ataluren的合成方法。方法:以3-氰基苯甲酸（2）为原料,经酯化、加成反应生成3-（N-羟基脒基）-苯甲酸甲酯（4）,再与邻氟苯甲酰氯环合得到3-（（5-（2-氟苯基））-3-（1,2,4-噁二唑基））-苯甲酸甲酯（5）,最后水解得到Ataluren（1）。对重要中间体及目标化合物Ataluren进行熔点、质谱、核磁的结构鉴定。结果:按照改进的合成路线,成功合成了目标化合物Ataluren。通过质谱、核磁对重要中间体及目标化合物进行了结构确认,并且对Ataluren的合成工艺进行了优化,提高了收率。结论:本研究以3-氰基苯甲酸为原料,经四步反应合成了目标化合物Ataluren。该路线,原料价廉易得,条件温和,操作简便,Ataluren纯度符合用药要求。第二部分高效液相色谱法测定Ataluren的含量及有关物质的研究目的:建立测定Ataluren含量的高效液相色谱方法,确定药物可能的降解途径和降解产物。方法:色谱条件:SunFireTM C18色谱柱（150 mm×4.6 mm,5μm）;流动相为乙腈-0.1%甲酸水（50∶50）,流速:0.8 mL/min,进样量:10μL,柱温:室温。结果:在上述色谱条件下,测定Ataluren含量以及经高湿、高热、酸、碱、光照、氧化破坏所产生的有关物质彼此之间与Ataluren主峰可得到有效的分离;线性方程为Y=55.237X+285.82,（r2=0.9992）（5μg/mL250μg/mL）。最低检测限1μg/mL。供试品溶液室温放置24 h内稳定。同一供试品溶液重复进样6次后,其峰面积RSD值均小于1.5%,精密度良好。平均回收率为99.30%,RSD值均小于1.5%。结论:采用高效液相色谱法分析Ataluren的有关物质,方法简便、灵敏、专属性强,准确度好。可用于Ataluren生产及储存过程中有关物质的检测。第三部分Ataluren在大鼠体内的药动学研究目的:采用HPLC-MS/MS技术,建立HPLC-MS/MS测定大鼠血浆中Ataluren浓度的方法,用于研究灌胃给予大鼠Ataluren后的动力学特征。方法:1色谱条件:色谱柱SunFireTM C18色谱柱（150 mm×4.6 mm,5μm）,流动相为乙腈-0.1%的甲酸水溶液,梯度洗脱,洗脱程序如下:洗脱程序如下:初始04 min,30%A;48 min,3036%A;812 min,36%95%A;流速:0.6 mL/min。进样量:10μL。2质谱条件:电喷雾离子（ESI）源;检测方式:多反应监测（MRM）模式;采用正离子模式;源喷射电压:5500 V;离子源温度（TEM）:650℃;帘气（CUR）:25 psi;雾化气（Gas 1）:60 psi,加热气（Gas 2）:65 psi。被测成分的监测离子对m/z 285/123,解簇电压（DP）:44 V,碰撞能量（CE）:23 eV。内标物的监测离子对m/z 254/157,解簇电压（DP）:53 V,碰撞能量（CE）:22 eV。3生物样品的采集和预处理:取6只雄性wister大鼠,体重250±10 g,分别灌胃给予30 mg/kg的Ataluren,分别于给药后0.25、0.5、1、2、3、4、6、8、12和24 h眼眶静脉取血,置肝素化的离心管中,血浆样品采用乙腈沉淀蛋白。采用内标法进行定量。4药动学研究与分析:根据测定的结果,绘制药-时曲线,采用非房室模型计算药物动力学参数。结果:1.方法学验证:Ataluren的标准曲线方程为Y=1.67416X-0.1000109（r2=0.9851）（50-1000 ng/mL）;Ataluren低、中、高三种浓度血浆样品的日内精密度RSD值分别为3.3%,11.8%和12.0%;日间精密度RSD值分别为2.3%,7.5%和7.8%;准确度值分别为0.6%,1.1%,-1.1%。Ataluren低、中、高三种浓度模拟血浆样品的回收率分别为94.7%,96.8%和93.7%,RSD值分别为8.2%,9.4%和7.9%;低、中、高三个浓度在处理后的血浆基质中的峰面积,与等量的低、中、高三个浓度对照品溶液峰面积之比分别为98.7%,96.8%,98.7%,RSD值分别为10.7%,7.5%和8.2%。2.药动学参数:AUC0-t:14.98±2.37μg/L·h,AUC0-∞:15.94±3.15μg/L·h,Cmax:3.14±0.33μg/L,Tmax:3h,t1/2:5.86±0.17h,Cl:1.935±0.32L/h/kg,V:13.97±0.49L/kg。结论:本研究建立的样品测定方法,快速、灵敏、专属性高、稳定性好,可以用于Ataluren在大鼠血浆中的测定。第四部分Ataluren在大鼠体内代谢产物的研究目的:采用UPLC/QTOF-MS技术,建立检测和发现Ataluren药物在体内的代谢产物及结构鉴定的方法,用于研究大鼠灌胃给予Ataluren后,其血浆中的代谢产物。方法:1色谱条件:采用UPLC/qTOF-MS技术分析样品。色谱柱为SunFireTM C18色谱柱（150 mm×4.6 mm,5μm）;流动相为乙腈（A）和0.1%的甲酸水溶液（B）,梯度洗脱,梯度洗脱程序如下,10%-35%A（0-15min）,35%-60%A（15-30 min）,60%-80%A（30-45 min）,85%-95%A（45-60 min）;流速:0.6 mL/min。进样量:5μL;进样器温度:室温。2质谱条件:高分辨质谱采用ESI源,正离子模式,全扫描采集,运行时间为60 min。源喷射电压（IS）为5500 V;雾化温度为650℃;雾化气（GS1）:65 psi;辅助气（GS2）:60 psi;气帘气:35 psi;DP:44 V;CE:23 eV;每三针用CDS校正液校正。3生物样品的采集和预处理:取6只雄性wister大鼠,体重250±10g,分别灌胃给予30 mg/kg的Ataluren,分别于给药后0.25、0.5、1、2、3、4、6、8、12和24 h内眦取血,置肝素化的离心管中,采用乙腈沉淀蛋白。4代谢物发现和鉴定:将各生物样品在Triple TOF?5600质谱仪中进样分析,利用Metabolite 1.5软件进行无目标代谢物的筛查寻找代谢产物,根据二级质谱裂解规律推测代谢产物结构。结果:在给药后的血浆样品中寻找到6个代谢产物;并解析了其各自的代谢途径。结论:本研究采用UPLC/qTOF-MS技术,成功发现和鉴定了大鼠体内Ataluren的代谢物,为研究Ataluren在体内的代谢奠定了基础。