论文部分内容阅读
阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)是一种常见的老年痴呆疾病,AD的炎症机制学说逐渐形成并引起了国内外学者的热切关注。作为脑内主要的免疫活性细胞,小胶质细胞在AD炎症中的作用及其与神经元细胞变性的关系己成为近年来研究的焦点。在中枢神经系统的炎症进程中,多种因素可以诱发小胶质细胞的活化,活化的小胶质细胞可释放包括NO及TNF-α在内的大量的神经毒性因子,导致神经元的功能失调和细胞死亡。通过抑制小胶质细胞的活化来保护神经元有可能成为防治AD的一个重要策略。 本文建立了LPS激活的N9小胶质细胞条件培养液造成原代培养大鼠皮层神经元损伤模型,并考察7种已知能够抑制小胶质细胞活化的天然成分对损伤的逆转,以及2种抗氧化成分葡萄多酚和原花青素对这种损伤的保护作用。 首先,采用MTT法考察了N9条件培养液作用于原代培养大鼠皮层神经元的时间和体积百分浓度依赖关系,确定了条件培养液造成损伤的时间和体积百分浓度分别为24小时和100%;采用米诺环素作为阳性药,发现米诺环素能够剂量依赖地抑制LPS引起的N9活化,并且其细胞外液降低了N9条件培养液对神经元的损伤作用。证明该模型能够反映出病理条件下小胶质细胞活化对神经元的损伤并能够用于评价药物作用。 其次,对上述模型的损伤机制进行了初步的探讨。H2O2损伤敏感性实验结果显示,条件培养液作用后使阈下浓度的H2O2对神经元造成了损伤;但条件培养液作用后,原代培养大鼠皮层神经元中超氧化物歧化酶(SOD)活力和培养液中脂质过氧化产物丙二醛(MDA)含量均不发生显著性变化;以Fura-2/AM为细胞内钙离子的荧光指示剂,用荧光分光光度仪检测小胶质细胞活化的条件培养液对PC12细胞胞浆游离钙离子浓度的影响,结果显示条件培养液显著升高PC12细胞胞浆游离钙离子浓度。 在评价9种天然产物的作用时,我们将天然成分和LPS共同作用于N9小胶质细胞后收集细胞外液作用于原代培养大鼠皮层神经元,MTT法考察细胞存活率,结果显示,除人参皂苷Rd,人参皂苷Rb2、Re、Rg1、RT5、PF11和葡萄提取物白藜芦醇、多酚、原花青素的条件培养液均能够逆转神经元细胞存活率的下降。为进一步阐明天然成分的作用,即考察条件培养液中可能残留的天然成分的影响,我们又采用了提前给药和同时给药两种方式,提前4h给予神经元这9种天然成分后将其洗去,加入LPS激活的N9条件培养液,结果显示人参皂