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磷脂酶A1辅助蛋白PlaS是一段在编码基因plaA的下游序列,它与磷脂酶A1在大肠杆菌中的高活性表达密切相关。为研究辅助蛋白PlaS的性质及其对磷脂酶A1的酶活调控机制,构建SP28重组质粒。实验表明,重组质粒中辅助蛋白PlaS的表达量极低,不能被SDS-PAGE检测到,仅通过Western Blot技术,才检测到其极微量的表达。本论文通过对辅助蛋白PlaS的蛋白结构进行生物信息学分析,并以此确定利用PCR技术对辅助蛋白PlaS的N端35个氨基酸进行截短处理,成功构建重组质粒dSP28。对构建的重组质粒dSP28进行诱导表达,结合发酵培养基优化,获得了大量的可溶性目的蛋白。最后,通过酵母双杂交技术,共表达菌株dBP28的构建,以及Biacore蛋白互作实验,对辅助蛋白PlaS与磷脂酶A1的体内和体外相互作用特性进行研究。主要研究内容和结果如下:（1）磷脂酶A1辅助蛋白PlaS表达系统的构建利用生物信息学手段,对plaS基因序列进行分析,为促进磷脂酶A1辅助蛋白胞内可溶性表达,将辅助蛋白PlaS的N端截短了35AA。辅助蛋白截短后的dplaS基因插入载体p ET-28a（+）中,再将测序验证正确的重组质粒转化到BL21（DE3）宿主菌中进行表达,从而成功构建重组表达菌株dSP28。（2）磷脂酶A1辅助蛋白发酵培养基优化及蛋白分离纯化将构建成功的dSP28菌株进行发酵培养,为使目的蛋白在细胞内大量可溶性表达,比较不同组分的发酵培养基对目的蛋白可溶表达的影响,筛选出最适发酵培养基为TB加3%甘油的发酵培养基。利用该发酵培养基对dPlaS诱导表达,并用AKTA系统对目的蛋白进行纯化,得到纯化后的目的蛋白浓度为33.78μg/mL。（3）PlaA与辅助蛋白PlaS和dPlaS体内相互作用研究采用酵母双杂交技术,通过分子克隆成功构建诱饵质粒pGBKT7-PlaA,猎物质粒pGADT7-PlaS和pGADT7-dPlaS。先将诱饵质粒pGBKT7-PlaA转入酵母感受态细胞进行自激活验证,若未发生自激活反应,则将诱饵质粒pGBKT7-PlaA分别和猎物质粒pGADT7-PlaS,pGADT7-dPlaS共转进Y2HGold酵母感受态细胞,并增加阴性和阳性对照。结果表明,诱饵蛋白未发生自激活,随后进行的共转化实验中,阳性对照组中的菌落颜色与诱饵质粒和猎物质粒共转化平板上菌落颜色一致,均为蓝色,而阴性对照组中的菌落颜色为白色,说明PlaA与PlaS蛋白及PlaA与dPlaS在体内发生相互作用,激活酵母中的报告基因,所以二者间存在相互作用。为进一步验证PlaA与辅助蛋白PlaS和dPlaS体内相互作用,构建了plaA基因和dplaS基因的共表达菌株dSP28,并与实验室前期构建的含有pla A基因和plaS基因重叠菌株BP28的磷脂酶A1的酶活相比较。结果发现,共表达菌株中辅助蛋白dPlaS对PlaA的表达有促进作用,且酶活有明显提高。说明,截短后的辅助蛋白dPlaS与PlaA间存在相互作用。（4）PlaA与辅助蛋白dPlaS体外相互作用将实验室前期构建得到的AP28重组质粒进行发酵培养,得到大量PlaA的包涵体,对得到的包涵体进行变复性,并用AKTA蛋白纯化仪纯化得到PlaA纯蛋白。同时,对大量可溶性表达的辅助蛋白进行纯化,使纯化后的PlaA与辅助蛋白dPlaS纯度均达到90%以上。随后,将得到的纯蛋白在Biacore蛋白互作仪进行互作,发现PlaA与辅助蛋白dPlaS能够特异结合,并呈现很好的浓度依赖,两蛋白间的结合速率ka为9223 Ms-1,解离速率kd为1.054E-5 s-1,平衡亲和力KD为1.143E-9 M。