为了寻找X和Y两种类型精子之间的蛋白差异，利用抗原抗体反应分离X、Y精子，进而实现性别控制，本实验对牛精子质膜提取及二维电泳分离牛精子全蛋白进行了研究。选择手工玻璃研磨器研磨法结合氮气压力爆破法破碎精子细胞，借助扫描电镜技术在3000倍下对其结果进行分析观察和验证。 在利用二维电泳技术分离牛精子全蛋白时，对不同的细胞裂解方法、不同蛋白上样量、不同胶条长度的二维电泳结果进行了比较，结果发现采用尿素一盐酸胍两步法裂解精子，使用13cm非线性固相干胶条(pH3～10)，能获得较好的精子蛋白二维电泳效果。采用ImageMasterTM2DPlatinum软件对图谱进行分析，可检测出约800多个蛋白质点，分子量基本分布在10～100KD，等电点约为4～9的区域内。切取凝胶图谱上的2个蛋白质点进行脱色，胶内酶解消化以后利用MALDI-TOFMS分析测定，再通过数据库查询鉴定蛋白质，结果表明有1个蛋白质点获得了满意的肽指纹图谱，搜索到7个匹配的肽段，覆盖率为32％，符合蛋白质鉴定有6～20个肽段匹配，覆盖率在15％以上的要求。精子蛋白双向电泳条件的摸索，为后续牛精子X、Y差异蛋白的检测和分析奠定了基础。