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细胞中的蛋白质大多与其它蛋白结合而发挥作用,多种不同种类的蛋白质可特异性地与其它蛋白质相互作用结合成非共价复合物。研究蛋白质与蛋白质相互作用时,酵母双杂交技术是常用方法。FKBP38 (FK506-binding protein 38)作为FKBP家族的一员,是一个多功能蛋白,通过与不同的蛋白相互作用参与调控细胞增殖、凋亡等多种生命过程,并可能与细胞内氨基酸信号转导有关。本文采用酵母双杂交技术,以FKBP38为诱饵蛋白筛选绒山羊胎儿成纤维细胞(GFb) cDNA文库,得到与FKBP38相互作用蛋白,并对靶蛋白进行初步功能验证,为进一步了解FKBP38及其相互作用蛋白在调控细胞生长与代谢中的作用与机制提供基础数据。实验首先以pGBKT7-FKBP38为诱饵蛋白,用酵母双杂交技术从pGADT7-cDNA文库中筛选出与FKBP38相互作用的未知蛋白；然后对获得的未知蛋白进行一对一酵母转化实验和四轮筛选,鉴定阳性克隆,测序并通过序列比对分析鉴定编码捕获蛋白的基因；最后,从筛选到的靶蛋白中选出SQSTM1/p62蛋白作为下一步研究目标,采用免疫共沉淀验证FKBP38与SQSTM1/p62之间的相互作用关系,构建SQSTM1/p62基因真核表达载体及其靶向shRNA表达载体,转染GFb, MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期变化,初步了解SQSTM1/p62基因的功能。结果表明：1.含pGBKT7-FKBP38质粒的Y2H酵母菌和含pGADT7-cDNA质粒的Y187酵母菌进行酵母双杂交后,通过四轮缺陷培养基及相应抗生素筛选,获得了7个酵母菌株；2.将获得的7个酵母单克隆分别用一对一的酵母转化实验,验证与FKBP38有相互作用后测序,分析序列确定筛选到的蛋白分别为eukaryotic translation initiation factor 1 (EIF1),40S ribosomal protein S5-like(LOC102183449), CD81 molecule(CD81), actin gamma 2 (ACTG2), sequestosome 1 (SQSTM1), ArfGAP with coiled-coil, ankyrin repeat and PH domains 3(ACAP3)和PDZ and LIM domain 7 (PDLIM7);3.利用免疫共沉淀实验验证FKBP38与SQSTM1/p62之间的相互作用；4.克隆得到的白绒山羊SQSTM1/p62基因cDNA全长1147bp,构建了靶向SQSTM1/p62基因的shRNA载体pRNAT-U6.1-shSQSTM1/p62和SQSTM1/p62基因过表达载体pIRES2-EGFP-SQSTM1/p62; 5. SQSTM1/p62基因过表达载体与RNA干扰载体分别转染GFb。与对照组相比,SQSTM1/p62基因转录后沉默时活细胞数量明显降低,细胞增殖受到抑制；6.细胞周期检测表明,与对照组S期细胞比率28.37%相比,SQSTM1/p62基因转录后沉默组S期细胞比率为17.26%,过表达SQSTM1/p62基因组S期细胞比率为36.72%,均具有显著差异(p<0.05),表明SQSTM1/p62基因对细胞周期有明显的调控作用。综上所述,本文利用酵母双杂交技术筛选出FKBP38相关蛋白7个,对其中SQSTM1/p62功能进行了初步的探究,表明SQSTM1/p62对GFb增殖和细胞周期具有明显的调控作用。FKBP38与SQSTM1/p62间相互作用关系为我们以后研究氨基酸信号转导的分子机制提供了条件。