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西瓜[Citrullus lanatus (Thunb.)Mansfeld var.citroides]是葫芦科(Cucurbitaceae)西瓜属中栽培种,是一种重要的蔬菜作物,并作为一种高产值的经济作物在世界各地被广泛种植。但由于各种病害的危害,西瓜的产量和品质受到严重的影响。因此提高其抗病性一直是十分重要的研究课题。本试验以西瓜品种“黄美人”、“F17”和“早佳”为材料,通过建立西瓜离体再生体系,利用农杆菌介导法将番茄抗病转录因子Pti4基因导入到西瓜中,并对转基因植株进行PCR检测。主要研究结果如下:1.西瓜离体再生体系的建立1)暗培养对西瓜种子的萌发率和出苗率都有一定程度的提高。暗培养3天的西瓜种子萌发率和成苗率分别为96%和94%,优于对照组。2)本试验筛选出的最佳外植体为子叶下部与完整子叶,二者的不定芽诱导率没有明显差异,分别为88.56%和89.67%,其不定芽诱导数分别为7.45和7.78;较其他外植体都高。3)IAA的添加与否对子叶不定芽的诱导无明显影响。适合子叶不定芽诱导的6-BA的最佳使用浓度为2mg/L-3mg/L之间;子叶节最适诱导培养基为MS+6-BA (2.0 mg/L)+IAA(0.2 mg/L)。4)3种基因型的不定芽诱导率之间有较大差异,早佳明显优于黄美人和F17,其不定芽诱导率和诱导数分别为100%和4.73个。5)在不定芽伸长过程中,与对照相比,0.2 mg/LKT对不定芽的伸长无明显促进作用,且伸长后的不定芽较难生根。2.西瓜的遗传转化的研究1)在暗处预培养2d时抗性芽率最高,达到10.0%。2)侵染时间为10 min的外植体的抗性芽率较5 min和15 min的高,达到11.7%。3)共培养时间为2d时抗性芽率最高,为16.7%。4)最佳筛选培养基为:MS+6-BA(2.0 mg/L)+Kan(100 mg/L)+Cef(500 mg/L)。5)通过农杆菌介导法将外源目的基因Pti4转入西瓜中,共获得67株西瓜Kan抗性植株。用NPTⅡ引物对这67株抗性植株进行PCR检测(空白作为阴性对照,携带目的基因Pti4的农杆菌菌液作为阳性对照),其中49株抗性植株扩增出预期基因片段,转化率约为73.1%。