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喜旱莲子草(Alternanthera philoxeroides(Mart.)Griseb)是一种水陆两栖以宿根性克隆为主要生殖方式的入侵植物。在研究喜旱莲子草生态入侵机制的同时,发现喜旱莲子草的性别有两种亚稳定状态,即在贫瘠而水分充足的生境中正常的雌雄同花群系占主要地位,而在营养丰富的生境中雄蕊心皮化种群系占主要地位。为了解喜旱莲子草雄蕊心皮化现象花发育的表达机制,利用抑制消减杂交(SSH)技术构建了喜旱莲子草正常雌雄同花和雄蕊心皮化花序的正反向cDNA文库。
从正反向cDNA文库中挑取阳性克隆测序,经序列软件分析共获得了231条EST,其中包括正向库123条EST序列,反向库108条EST序列。对所有EST通过BLAST在线比对分析,然后对EST进行功能注释,其中正向库EST分析显示有95条序列找到同源匹配基因,反向库有73条序列找到同源匹配基因,而正反向文库中共有63条EST未找到同源匹配序列,可能代表着新的基因。
对找到同源匹配的EST进行初步功能预测,并根据基因功能预测分类体系对所有EST进行功能分类总结,结果显示:EST功能涉及花性别发育、细胞代谢、生长发育、抗性适应、转录调控、酶调节、叶绿体和胞质基因、细胞内组件等重要生命过程的八种不同功能类型。其中筛选到八类与已知控制花性别发育相关的EST,功能涉及调控花序形成、调控花粉管萌发、胞质育性相关及与果实发育相关的基因等,具体包括以下基因:同源异型盒HD-ZIP基因家族、MADS-box基因家族、线粒体可育G/A/B基因及不育NA/NB基因、线粒体RNA编辑相关基因、果实合成相关的RLS基因、果实成熟相关的扩张蛋白基因、SCA1基因,CCLS4家族蛋白等。这些EST的获得为进一步了解喜旱莲子草雄蕊心皮化现象及花发育相关基因的克隆及其功能解析奠定了基础,为研究花雄蕊心皮化的完整分子机制提供思路,也为ABC(D)模型提供补充与修正。
通过文库分析还筛选到大量与生理抗性、细胞代谢以及环境适应相关的基因,从侧面为表型可塑性基因的假设提供了分子佐证,为喜旱莲子草极强的入侵能力及适应机制提供了分子理论的依据。