LPS、TGF-β1对小鼠BMDC的影响及TGF-βRⅠ在哮喘遗传背景不同小鼠BMDC中的研究

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第一部分LPS、TGF-β1对小鼠骨髓来源的树突状细胞的生物学作用目的:探讨加入LPS、TGF-β1体外刺激小鼠骨髓来源树突状细胞(BMDC)的方法及对其生物学特性的作用。方法:GM-CSF和IL-4诱导培养BMDC 6d后分为四组,即分别用培养基(对照组)、LPS(LPS组)、TGF-β1(TGF-β1组)、LPS +TGF-β1(LPS +TGF-β1组),刺激BMDC 48 h后在相差显微镜下进行细胞形态学观察,流式细胞术检测细胞表型CD11C、CD80、CD86、MHCⅡ,混合淋巴细胞反应检测其抗原提呈功能,收集细胞培养上清液用ELISA检测IL-6,IL-12 p70的表达。结果: LPS组具有最典型的成熟样DC形态,CD80、CD86及MHCⅡ的表达水平最高分别为98.71%,95.26%,99.02%,混合淋巴细胞反应和分泌IL-6、IL-12 p70能力最强,与对照组、TGF-β1组、LPS+TGF-β1组比较差异具有统计学意义(P<0.05),TGF-β1组成熟样DC形态最不典型,CD80、CD86和MHCⅡ的表达水平最低分别为46.84%,42.16%,62.52%,混合淋巴细胞反应和分泌IL-6、IL-12 p70能力最弱,与对照组、LPS组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:LPS在DC的分化晚期可以刺激其成熟,并且使其具有更高的生物学特性,TGF-β1虽不抑制DC的分化,但可以抑制DC的成熟,从而降低其生物学特性。第二部分TGF-βRⅠ在哮喘遗传背景不同小鼠BMDC中的差异目的:探讨哮喘遗传背景不同的Balb/C小鼠和C3H/HeJ小鼠的骨髓来源树突状细胞表达TGF-βR1的差异。方法: GM-CSF和IL-4诱导培养Balb/C小鼠和C3H/HeJ小鼠骨髓来源的树突状细胞,倒置显微镜观察细胞形态,流式细胞术检测树突状细胞表型CD11C、CD80、CD86、MHCⅡ,提取树突状细胞的总RNA,通过实时荧光定量PCR的方法检测两种小鼠骨髓来源的树突状细胞中TGF-βRⅠ的表达是否存在差异。结果:培养Balb/C小鼠和C3H/HeJ小鼠骨髓来源的树突状细胞具有典型的细胞形态,流式细胞术检测CD11C、CD80、CD86、MHCⅡ表型各组依次表达分别是Balb/c小鼠75.09%、91.60%、82.98%、91.54%。C3H/HeJ小鼠为74.73%、92.88%、85.39%、91.93%。因此可以保证培养树突状细胞的纯度及其成熟度,提取的总RNA可以保证纯度和浓度,通过实时荧光定量PCR方法检测到在两种小鼠骨髓来源的树突状细胞的TGF-βRⅠ的表达存在差异。结论:Balb/C小鼠和C3H/HeJ小鼠中提取的骨髓来源的树突状细胞中TGF-βRⅠ的表达存在差异。
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