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目的:根据衰老的氧化应激理论诱导细胞氧化应激，观察其硫氧还蛋白(Thioredoxin，Trx)的变化，探讨通过Trx基因的RNA干扰(RNAinterference，RNAi)建立神经细胞衰老模型的新途径，为研究衰老及相关神经退行性疾病的发病机制、临床防治等提供新的理论依据。
方法:以过氧化氢(Hydrogenperoxide，H2O2)诱导PC12细胞损伤，观察细胞活性、形态学变化、Trx-1、Trx-2各自的基因表达变化；Trx-1基因小干扰RNA(SmallinterferingRNA，siRNA)片段在脂质体介导下转染入PC12细胞，通过Real-TimeRT-PCR和WesternBlot分析转染前后细胞Trx-1mRNA及蛋白水平的表达变化，筛选其中Trx-1表达抑制效率最高的siRNA，建立Trx-1表达下调的神经细胞模型；以正常PC12细胞做为空白对照组，以H2O2诱导的PC12细胞损伤组做为阳性对照，来观察RNA干扰的神经细胞模型，通过MTT法检测细胞活性，通过SOD和MDA检测细胞的抗氧化能力和脂质过氧化情况，利用流式细胞仪检测细胞凋亡率。
结果:
1.H2O2诱导PC12细胞的活性呈现剂量依赖性和时间依赖性变化，300μmol/LH2O2作用4h后，与正常对照组相比，细胞呈现显著性损伤(P<0.01)，镜下可见其相应的形态学改变；
2.Real-TimeRT-PCR结果显示，100-200μmol/LH2O2作用4h，Trx-1mRNA表达显著增加(P<0.01vsControl)，Trx-2mRNA表达无变化(P>0.05vsControl)，当H2O2达300μmol/L时，Trx-1、Trx-2的mRNA表达均开始下降，并具统计学意义(P<0.01vsControl)；
3.WesternBlot结果显示，l00-200μmol/LH2O2作用4h，Trx-1蛋白表达显著增加(P<0.01vsControl)，当H2O2达300μmol/L时，Trx-1蛋白表达开始下降，且差异具有显著性(P＜0.01vsControl)，这亦与Real-TimeRT-PCR结果相吻合；
4.将靶向Trx-1的3对SiRNA片段转染到PC12细胞，48h后Real-TimeRT-PCR检测3个RNAi组Trx-1mRNA含量分别较对照组下降了63％、49％、54％；
5.转染48h后WesternBlot分析测定3个RNAi组Trx-1蛋白表达的抑制率分别为59.7％、9.1％、19.5％；通过RNAi使Trx-1基因表达下降达60％，成功筛选到Trx-1基因的高效特异性干扰序列；
6.以此高效特异性干扰序列转染的PC12细胞做为RNA干扰组，以300μmol/LH2O2作用4h的PC12细胞为H2O2损伤组；与正常对照组相比，H2O2损伤组和RNA干扰组的细胞活性均有显著抑制，抑制率分别为61.4％、66％，胞内SOD活力明显降低，MDA含量明显升高，流式细胞仪分析示细胞凋亡率增加，分别为(17.1±3.9)％、(20.87±5.6)％，上述变化均有统计学意义(P＜0.01vsControl)，但H2O2损伤组和RNA干扰组之间并无显著性差异(P＞0.05)。
结论:研究了H2O2诱导后PC12细胞Trx的两个亚型Trx-1、Trx-2各自变化特点。通过PC12细胞Trx基因的RNA干扰表达这一新途径成功建立神经细胞衰老模型，为衰老及相关神经退行性变的实验研究开辟了新道路，其进一步研究还有待深入探讨。关健词：RNA干扰;硫氧还蛋白;小干扰RNA;过氧化氢;PC12细胞