茭白黑粉菌原生质体制备及核型初步分析

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茭白(Zizania latifolia Turcz.)为禾本科菰属(Zizania Linnaeus)多年生水生宿根草本植物,其膨大肉质茎是茭白生长期间受茭白黑粉菌(Ustilago esculenta P. Henn.)侵染后刺激而形成。明确茭白黑粉菌的分子生物学特性是了解茭白茎膨大机制的前提。本文探讨了利用脉冲电泳技术分离茭白黑粉菌的染色体大小和数量。试验发现,茭白黑粉菌脉冲电泳的最佳样品制备方法是酶解破壁法,具体为:取液体培养36h的茭白黑粉菌孢子,用1.4mol/1KCl(pH=5.8)配制的终浓度均为10mg/ml的裂解酶、崩溃酶和纤维素酶的混合液[酶解液(m1):孢子(g)=20],在30℃,70rpm条件下对其进行震荡酶解4h。此外,本试验通过调整脉冲电泳的参数,分离出了茭白黑粉菌大小分别为1822kb、1606kb、873kb、727kb、648kb、564kb、533kb、464kb、438kb和396kb的10条染色体,为今后进行茭白黑粉菌分子生物学研究提供了基础。
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