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背景及目的神经母细胞瘤(Neuroblastoma, NB)是小儿最常见的恶性实体肿瘤之一,具有恶性程度高、侵袭力强,而且早期转移率高、晚期病例多、治疗效果差的特点。1999年小儿实体肿瘤协作组的统计资料显示,神经母细胞瘤大约占全部小儿恶性实体肿瘤病例的21.4%。在先天性畸形和感染性疾病诊治水平已明显提高的当今社会,神经母细胞瘤仍然是严重威胁儿统生命健康的一个常见死亡原因。所以,如何提高神经母细胞瘤的临床研究和诊治水平并探讨研究肿瘤的预后,仍然是国内外学者普遍关注的一个问题。建立可靠的动物模型是研究成功的基石,目前常用的荷人神经母细胞瘤动物模型为裸小鼠的皮下移植瘤和神经母细胞瘤原位瘤。随着肿瘤细胞的失控性增殖生长,机体需要大量的营养物质和氧气,导致大量的营养物质和氧气被消耗,形成一个缺氧环境,为克服缺乏营养物质和缺氧对肿瘤生长的影响,肿瘤内通过形成新生血管形促使肿瘤继续生长和增殖。缺氧诱导因子(hypoxia- inducible factor, HIF)是近年来发现的一类介导哺乳动物细胞内低氧反应的核转录复合体,可促进有机体对低氧的适应过程,是细胞在基因转录水平协调缺氧变化最主要的调节因子,研究证实HIF是介导肿瘤缺氧适应的关键性转录调控因子,可在基因水平上直接调控血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)、葡萄糖转运蛋白-1 (glucose transporter-1, GLUT-1)、转化生长因子-α(transforming growth factor-α, TGF-α)等细胞因子的表达,进而促进肿瘤细胞的增殖、侵袭、转移等活动。本实验利用人肾上腺神经母细胞瘤细胞株建立裸鼠皮下移植人神经母细胞瘤模型,并探讨神经母细胞瘤中HIF-1α、VEGF、TGF-α等的表达情况,了解他们在肿瘤与正常组织中表达的差异,旨在了解缺氧诱导因子及其相关蛋白在神经母细胞瘤的发生发展中的作用,探讨其与肿瘤的临床病理、预后的关系,为NB的发病机理研究和诊治提供新的思路与方法。方法应用KP-N-NS人肾上腺神经母细胞瘤细胞株建立裸小鼠皮下移植瘤模型40只,作为肿瘤组；阳性对照组选取郑州大学第一附属医院小儿外科2006年1月至2010年1月手术切除的神经母细胞瘤肿瘤标本；阴性对照组选取正常人肾上腺髓质组织。采用Envision免疫组织化学方法检测各组组织中HIF-1α、VEGF及TGF-α的表达情况,并对试验结果进行统计学处理。结合免疫组化结果将肿瘤组分为HIF-1α阳性组与HIF-1α阴性组,对两组的生存情况(体重变化、瘤体重量、存活天数)进行比较,并对试验结果进行统计学处理。结果4周后解剖结果证实成模率80%；HIF-1α及其相关蛋白的阳性表达均主要表现为细胞核及细胞质内棕黄色颗粒；肿瘤组、阳性对照组与正常组HIF-1α、VEGF、TGF-α阳性表达率分别为73.70%±10.68%、69.80%±9.91%、71.43%±8.52%,70.35%±13.09%、67.45%±9.91%、70.30%±9.86%和9.67%±4.53%、6.80%±3.40%、6.50%±4.44%,三种蛋白在肿瘤组织与正常组织中的表达差异具有显著性(P<0.01),肿瘤组与阳性对照组HIF-1α, VEGF、TGF-α三种蛋白的IOD(阳性染色的积分光密度)值分别为141.97±7.98、151.85±14.35、139.94±4.50,141.34±6.44、144.06±8.51、149.00±13.63,均明显高于阴性对照组,p<0.0l。HIF-lα在肿瘤组与阳性对照组中的表达与VEGF的表达成正相关(χ2=7.778r=0.504 P<0.01),HIF-1α在肿瘤组与阳性对照组中的表达与TGF-α的表达无明显相关性(χ2=0.208 P=0.934 P>0.05)；HIF-1α阳性组与HIF-1α阴性组体重变化、瘤体重量及存活天数比较t值分别为：-3.43、3.69、4.30,P值均小于0.01。通过分析肿瘤组40例裸鼠生存时间与HIF-1α表达水平的关系发现,HIF-1α阴性组中位生存时间为24天,最长生存时间为33天；HIF-1α阳性组中位生存时间为17天,最长生存时间为22天；生存时间分别用LogRank, Breslow, Tarone-Ware检验,P值均小于0.05。结论1该模型用于研究人类神经母细胞瘤,造模时间短,成瘤率高,生物学行为与人类神经母细胞瘤接近。2 HIF-1α、VEGF、TGF-α在神经母细胞瘤中高表达,在肿瘤组织的表达明显高于正常组织。3 HIF-1α与VEGF在肿瘤组织中的表达有明显相关性,HIF-1α与TGF-α在肿瘤组织中的表达无明显相关性,HIF-1α与VEGF在肿瘤的血管浸润及转移过程中起了重要作用。4 HIF-1α阳性组小鼠较HIF-1α阴性组小鼠体重减轻明显、瘤体体积大、存活天数短,说明HIF-1α在神经母细胞瘤中阳性表达率的高低对神经母细胞瘤患儿的生存时间有明显的影响,HIF-1α的高表达可以认为是代表预后不良的一个重要指标。