论文部分内容阅读
第一部分:人外周血白细胞及卵巢颗粒细胞TERRA的表达研究研究目的:探索健康妇女和多囊卵巢综合征(PCOS)患者外周血白细胞及PCOS患者卵巢颗粒细胞TERRA表达情况。研究方法:用密度梯度离心法分离健康成年妇女和PCOS患者外周血白细胞以及卵巢颗粒细胞,制片后用特异PNA探针(CCCTAA)3-cy3进行RNA-FISH杂交检测TERRA的表达情况。研究结果:1.TERRA表达于细胞核,显示红色荧光信号,用RNaseA孵育(37℃)1小时后荧光信号消失,证明此信号为RNA信号,为TERRA表达。2.PCOS患者及正常对照组外周血白细胞及PCOS患者卵巢颗粒细胞均有TERRA表达。研究结论人体外周血白细胞及PCOS患者卵巢颗粒细胞均有TERRA表达。第二部分PCOS患者外周血白细胞端粒长度及TERRA表达相关性研究研究目的:探索TERRA在PCOS发病过程的作用及其与端粒长度的关系。研究方法:Real time PCR方法检测PCOS患者和健康对照组外周血白细胞端粒长度(peripheral blood leukocyte telomere length,LTL)及 TERRA 的表达,雅培和罗氏免疫发光分析仪及自动生化分析仪检测临床参数血清卵泡刺激素(follicle-stimulatinghormone,FSH)、黄体生成素(luteinizinghormone,LH)、催乳素(prolactin,PRL)、睾酮(testosterone,TTE)、雌二醇(estradiol,E2)、孕酮(progesterone,P)、脱氢表雄酮(dehydroepiandrosteronesulfate,DHEAS)、空腹血清胰岛素(fasting insulin,FINS)及空腹血糖(fasting plasma glucose,FGP),并分析其相关性。实验数据计量资料用均数士标准差(mean 士 SD)表示,各组间计量资料采用LSD协方差分析法,各组LTL与TERRA PCR值ln(T/S ratios)与实验室特征指标间相关性采用多元线性回归(multiple linear regression)分析。研究结果:1.与对照组比,PCOS组BMI、LH、TTE、DHEAS、FINS及FGP均显著高于对照组,Age、FSH、E2、P及PRL之间无统计学差异。2.PCOS和对照组中,外周血LTL都随着年龄的增长呈现下降的趋势,PCOS和对照组LTL与年龄呈负相关。3.PCOS患者外周血LTL长于正常对照组,TERRA表达低于常对照组。4.PCOS患者外周血TTE与LTL呈正相关,与TERRA呈负相关,而在正常对照组,TTE与这两者都没有相关关系。研究结论:PCOS患者外周血白细胞端粒长度高于正常对照,TERRA表达低于对照组,PCOS患者中,TTE与TERRA呈负相关,与LTL呈正相关。TERRA与TTE对PCOS外周血白细胞端粒长度起着一定的调节作用。第三部分:雄激素对TERRA和端粒酶活性调节机制研究研究目的:以卵巢颗粒细胞为研究对象,探索雄激素对TERRA和端粒酶活性调节机制。研究方法:卵巢颗粒细胞细胞按照不同密度接种于培养板,培养24h后用不同浓度梯度丙酸睾酮(O.1nmol/L,1nmol/L,10nmol/L,100nmol/L)刺激,48h后,MTT方法检测细胞活力,AnnexinV-FITC/PI试剂盒检测细胞凋亡,Westemblot方法检测人端粒酶催化亚单位hTERT蛋白表达,Real time PCR方法检测TERRA及人端粒酶反转录酶(Telomerase reverse transcriptase,TERT)mRNA 表达,PCR-ELISA方法检测端粒酶 RNA(Telomerase RNA component,TERC)活性。研究结果:1.高浓度丙酸睾酮(100nmol/L)抑制卵巢颗粒细胞的增殖。2.不同浓度梯度丙酸睾酮均促进卵巢颗粒细胞凋亡。3.不同浓度梯度丙酸睾酮均抑制TERRA表达。4.低浓度丙酸睾酮(0.1nmol/L)促进端粒酶反转录酶TERTmRNA及其蛋白的表达,中、高浓度(1nmol/L,10nmol/L,100nmol/L)丙酸睾酮抑制端粒催化亚单位hTERT mRNA及其蛋白的表达。5.0.1nmol/L,1nmol/L丙酸睾酮促进端粒酶RNA TERC表达,使端粒酶活性增强。研究结论:雄激素促进端粒酶反转录酶TERT mRNA及TERT蛋白的表达,促进端粒酶RNA TERC表达,同时抑制端粒重复序列RNA TERRA的表达,雄激素通过促进端粒酶催化亚单位TERT和端粒酶RNA TERC表达以及降低TERRA表达调节端粒长度。