背景与目的卵巢癌是全球范围内最常见的女性生殖系统肿瘤性疾病之一,其发病率仅次于鳞状细胞宫颈癌和子宫内膜癌而位居第三位,但其死亡率极高,接近65%,位居各类妇科肿瘤的首位,其中约半数以上患者因该病复发或在治疗过程中死亡。上皮性卵巢癌是卵巢肿瘤疾病中发病率最高的病理类型,约占总发病例数的85%~90%,并且患者极易发生死亡,尽管70%以上的患者均接受了外科手术治疗和标准的化学治疗,5年生存率依然很低。这些可能与卵巢癌的高度易转移性、某些细胞存在化学治疗抵抗性以及卵巢复杂的胚胎发育、组织解剖和内分泌功能有关。因此,深入研究卵巢癌的病因及发病分子机制对于临床卵巢肿瘤疾病的诊断、防治和预后工作具有深远的意义。阿司匹林是一种临床上使用非常广泛的非甾体抗炎药,常用于骨关节炎、类风湿性关节炎、各种发热和疼痛、动静脉血栓形成、凝血功能异常等疾病的治疗。到现在为止,阿司匹林抗肿瘤作用的具体分子机制仍然未清晰。此外,阿司匹林对多种人类肿瘤疾病的预防和治疗均有着积极的辅助意义,其在抗肿瘤研究中的巨大潜力应引起广泛的重视。SOX7基因定位于人类染色体8p23.1,包括两个外显子和一个内含子,具有HMG-box区域氨基酸序列高度保守性的特点,编码由377个氨基酸构成的小分子蛋白,参与调控早期的胚胎发育和内胚层分化等重要生物过程。染色体8p等位基因缺失是人类肿瘤疾病中最常见的细胞基因改变之一,缺失引起的抑癌基因失活是导致癌变发生的重要诱因。而SOX7基因恰恰位于这一区域,因此推测SOX7基因可能作为一种抑癌基因参与了肿瘤疾病的发生、发展。Wnt/β-catenin信号通路是Wnt基因参与调控的重要信号传导系统中最常见的一种信号通路,在进化上具有高度的保守性,其机制研究相对较清楚,在多种人类疾病特别是肿瘤疾病的发生发展中起着重要调控作用,并且Wnt/β-catenin通路中某些基因的沉默、突变或是缺少均可以引起该信号通路的异常活化,从而引起肿瘤的疾病的发生。SOX7基因可能通过对Wnt/β-catenin信号通路的调节作用发挥其在肿瘤细胞增殖、发育和凋亡等生理进程中的关键性作用,但其具体分子调节机制仍仍有待研究;且SOX7基因和Wnt/β-catenin信号通路基因在上皮性卵巢癌中的表达情况和分子作用机制以及两者之间的相互影响在国内外文献中罕见报道。本研究采用实时荧光定量PCR技术检测SOX7基因、Wnt/β-catenin信号通路下游靶基因β-catenin和cyclin D1分别在卵巢癌组织和正常卵巢组织中的表达情况,以及使用不同浓度阿司匹林刺激人上皮性卵巢癌SKOV3细胞后基因SOX7、β-catenin和cyclin D1分别在肿瘤细胞中表达水平的变化,同时利用MTT法检测不同浓度阿司匹林刺激对人上皮性卵巢癌SKOV3细胞增殖活性的影响。旨在探索SOX7基因与Wnt/β-catenin信号通路在上皮性卵巢癌发生中的作用及具体分子机制。方法(1)采用实时荧光定量PCR技术检测SOX7、Wnt/β-catenin信号通路下游靶基因β-catenin和cyclin D1分别在卵巢癌组织和正常卵巢组织中表达水平的差异。(2)使用不同浓度阿司匹林(0 mmol/L、0.5 mmol/L、1 mmol/L、2 mmol/L、3 mmol/L)作用于人上皮性卵巢癌细胞株SKOV3,采用实时荧光定量PCR法检测基因SOX7、β-catenin和cyclin D1分别在肿瘤细胞中表达水平的变化。(3)采用MTT法检测不同浓度阿司匹林刺激对人上皮性卵巢癌SKOV3细胞增殖活性的影响,并计算肿瘤细胞的抑制率。采用SPSS19.0统计软件对数据进行统计学处理,定量资料以均数±标准差()表示,符合正态分布的两组数据间比较采用独立样本t检验,正态分布的多组数据之间比较采用单因素方差分析(one-way ANOVA),多个样本均数之间的两两比较使用LSD-t检验,两组数据变量的关联性分析采用Pearson相关。以α=0.05作为检验水准。结果1 SOX7、β-catenin和cyclin D1在上皮性卵巢癌患者肿瘤组织和正常卵巢组织中的含量:SOX7、β-catenin和cyclin D1在正常卵巢组织和上皮性卵巢癌患者肿瘤组织中的表达情况分别是:SOX7,6.102±0.781 vs 1.701±1.104,t=3.614,P=0.001;β-catenin,2.312±0.267 vs 9.214±0.351,t=13.651,P<0.001;cyclin D1,3.021±0.981 vs 6.701±1.216,t=5.967,P<0.001。2阿司匹林刺激后人上皮性卵巢癌SKOV3细胞内基因SOX7、Cyclin D1和β-catenin的表达水平变化:使用不同浓度的小剂量阿司匹林刺激SKOV3细胞,基因SOX7的表达水平随刺激浓度增加而依次升高(分别为0.725±0.101 vs 0.947±0.011 vs 1.923±0.126 vs 2.857±0.218 vs 4.402±0.086,F=12.151,P<0.001),而基因β-catenin和cyclin D1的表达水平随刺激浓度增加而依次降低(分别为β-catenin:1.759±0.334 vs 1.644±0.645 vs 0.963±0.553 vs 0.705±0.618 vs 0.643±0.539,F=6.214,P<0.001;cyclin D1:2.313±0.142 vs 2.144±0.055 vs 1.542±0.033 vs 0.941±0.018 vs 0.323±0.012,F=4.903,P<0.001)。3阿司匹林刺激后SOX7、Cyclin D1和β-catenin表达水平的相关性分析阿司匹林刺激后,SOX7 m RNA表达量与Cyclin D1 m RNA表达量具有显著的相关性(r=-0.978,P<0.05);SOX7 m RNA表达量与β-catenin m RNA表达量具有显著的相关性(r=-0.983,P<0.05);Cyclin D1 m RNA表达量与β-catenin m RNA表达量具有显著的相关性(r=0.986,P<0.05)。4 MTT法检测不同浓度阿司匹林对人上皮性卵巢癌SKOV3细胞增殖活性的影响:小剂量阿司匹林对人上皮性卵巢癌SKOV3细胞的增殖活性具有明显的抑制作用(分别为0 vs 0.935±0.065 vs 11.784±2.743 vs 20.192±3.441 vs 32.462±5.821,F=20.481,P=0.000),并且随着浓度的升高,阿司匹林对细胞增殖活性的抑制作用越明显,对细胞的抑制率越大,细胞凋亡的越多,具有浓度依赖性趋势。结论1.SOX7基因可能作为一种抑癌基因参与EOC的发病机制,且EOC内存在Wnt/β-catenin信号通路的异常活化,。2.阿司匹林可显著上调人上皮性卵巢癌SKOV3细胞中SOX7,下调Cyclin D1和β-catenin,并抑制SKOV3细胞的增殖活性,促进凋亡发生,有机会作为一种新的抗肿瘤药物用于临床肿瘤的预防和治疗。3.SOX7基因可能是Wnt/β-catenin信号通路的一种负性调控因子。