研究目的1、探讨父母亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)基因C677T、胱硫醚β-合成酶(CBS)基因T833C、环境因素与子代先天性心脏病(CHD)发生的相关性;了解CHD及室间隔缺损(VSD)类型的危险因素;分析危险因素交互作用对VSD发生的影响。2、筛选单纯性VSD血清标志蛋白并构建其血清诊断模型,为进一步从蛋白质分子水平研究单纯性VSD的致病机理及发展其血清学诊断方法奠定基础。3、了解广西神经管畸形(NTDs)的基本分布情况,分析环境及行为危险因素。4、了解广西健康育龄人群MTHFR基因位点突变的分布及其与妊娠结局的联系。5、了解育龄妇女对NTDs的认知度、增补叶酸的依从性和评价宣教效果,为预防NTDs寻求更有效的干预模式。研究方法1、采用1∶1配对病例对照研究方法,对来自广西的115对CHD患儿与对照儿父母进行访谈式调查并抽取父母静脉血3ml作基因型分析,应用PCR限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法检测MTHFR基因C677T,PCR扩增阻滞突变体系(PCR-ARMS)方法检测CBS基因T833C。对CHD、VSD可能的危险因素进行Logistic回归分析,对筛选出VSD的危险因素之间作交互作用分析,其他数据分析作x~2检验。2、用CM10芯片检测56例单纯性VSD、85例儿科常见病患儿及23例其它CHD患儿血清,用Biomark Wizard软件分析数据、筛选VSD血清差异蛋白,用BiomarkerPatterns软件构建诊断模型。3、以入户或电话采访的方式对NTDs和对照的双亲进行调查,获取他们是否暴露于相关环境危险因素的资料,对暴露因素进行Logistic回归分析。4、抽取早孕妇女静脉血,提取全血DNA,用PCR-RFLP方法检测MTHFR基因位点多态性,再比较其妊娠结局。5、对参加NTDs知识学习和未参加学习的新婚育龄妇女按调查表内容展开调查,比较两组调查结果;并收集孕妇服用叶酸情况,追踪其妊娠结局。结果用卡方检验和方差分析进行统计分析。研究结果1、115例CHD各类型组成VSD 46例、PDA 14例、F4 13例、ASD 6例、其他单纯类型8例、复杂型CHD 28例。广西健康人群的MTHFR基因C/C、C/T、T/T三种基因型构成比分别为64.8%、29.6%、5.7%,C等位基因频率为79.6%,T等位基因频率为20.4%,CBS基因T/T、T/C、C/C三种基因型构成比分别为42.6%、47.8%、9.6%,T等位基因频率为66.5%,C等位基因频率为33.5%。母亲MTHFR基因的C与T等位基因频率比较差异具有统计学意义(P=0.036,OR=1.595,95%CI:1.029～2.471);对于VSD类型,父母组合的MTHFR基因C与T等位基因频率比较差异具有统计学意义(P=0.032,OR=1.724,95%CI:1.043～2.849)。Logistic回归分析表明,母亲孕早期接触农药、妊娠合并症、孕早期感冒、孕期情绪状况、母MTHFR基因型、母CBS基因型为子代发生CHD的危险因素;妊娠合并症、孕早期服中成药、孕期情绪状况、母MTHFR基因型为子代发生VSD的危险因素。交互作用分析表明妊娠合并症与孕期情绪状况、母MTHFR基因型与妊娠合并症、孕早期服中成药、孕期情绪状况间对VSD的发生存在交互作用。2、25例壮族单纯性VSD与36例壮族儿科常见病儿血清蛋白质谱比较,有7个蛋白成分在VSD血清中高表达,5个蛋白下调;21例汉族单纯性VSD与33例汉族儿科常见病儿血清蛋白质谱比较,有7个蛋白成分高表达,1个蛋白下调;不分民族56例单纯性VSD与85例儿科常见病儿血清蛋白质谱比较,有10个蛋白成分高表达,11个蛋白下调;不分民族56例单纯性VSD与23例其它CHD血清蛋白质谱比较,有9个蛋白成分高表达,16个蛋白下调;不分民族56例单纯性VSD、85例儿科常见病儿与23例其它CHD血清蛋白质谱比较,有25个蛋白成分在三组之间有统计学差异;3、在单纯性VSD与儿科常见病的血清诊断模型中,完整模型ROC曲线下面积为0.984,预测准确率为96.51%,灵敏度为97.06%,特异度为96.15%,阳性预测值为94.29%,阴性预测值为98.04%,简化模型分别为0.913、88.37%、97.06%、82.69%、78.57%和97.73%,两模型各主要诊断指标比较,除特异度为完整模型优于简化模型外,其它均无统计学差异;在单纯性VSD与非VSD的血清诊断模型中,完整模型ROC曲线下面积为0.988,预测准确率为95.00%,灵敏度为100.00%,特异度为92.42%,阳性预测值为87.18%,阴性预测值为100.00%,简化模型分别为0.948、94.00%、88.24%、96.97%、93.75%和94.12%,两模型主要诊断指标比较无统计学意义。4、广西七城市NTDs发生率为9.87/万,无脑儿、脑积水占的比例较高,居住地在农村占的比例比城市略高。母亲营养缺乏、患有妊娠并发症、孕期发烧和父亲饮酒是NTDs发生的危险因素。5、MTHFR基因多态性检测结果为野生基因型59.5%,杂合突变型34%,纯合突变型6.5%,三组基因型围产儿的出生体重和新生儿评分异常率的差别无统计学意义。6、554名妊娠妇女中,在孕前和孕后3个月每天服用叶酸的83名,占15.0%,怀孕后开始服用的122名,占22.2%,断续服用的27名,占4.9%,未服用叶酸的322名,占57.9%;文化程度初中和初中以下的妇女服用叶酸率较低,分别为33.3%和33.1%,大专的是48.996,大学及以上是65.096。7、育龄妇女知道叶酸可以预防NTDs的有48%,知道服用叶酸预防NTDs从孕前开始的只有13.4%,计划服用叶酸的只有23%,知道NTDs类型的有15%,知道NTDs发生的可能原因有26.2%,经过宣传讲解后,对NTDs和叶酸的认知率都提高到78%以上;文化程度为初中及以下的知道叶酸可以预防NTDs的只有14.28%,计划孕前开始服用叶酸的只有7.12%,而大学及以上的分别是86.96%,73.91%。8、服用叶酸组出生缺陷检出率为8.96‰,平均出生体重为3237.0克,早产儿发生率为6.43‰;未服用叶酸组分别为13.33‰、3119.3克和8.50‰,其中平均出生体重的差别有统计学意义。研究结论1、母亲MTHFR基因677TT型与子代CHD发生有关,父母双方MTHFR基因677C→T突变与子代VSD发生有关,父母CBS基因833T→C突变与子代CHD无相关性。母亲孕早期接触农药、妊娠合并症、孕早期感冒、孕期情绪状况、母MTHFR基因型为子代发生CHD的危险因素;妊娠合并症、孕早期服中成药、孕期情绪状况、母MTHFR基因型为子代发生VSD的危险因素。不分型CHD总的危险因素与VSD的危险因素不尽相同,交互作用分析提示危险因素共同引起子代VSD发生的过程中,存在着主要由某两个危险因素交互作用影响的可能,亦提示各类型CHD的发生存在相同的情况。2、单纯性VSD、儿科常见病儿与其它CHD血清蛋白质存在差异,质荷比6441、6640、8570及8700的蛋白质可能是VSD的血清蛋白标志物。3、两种VSD血清简化诊断模型具有较高的准确性,有较好的应用前景。4、表面增强激光解吸/电离飞行时间质谱技术是寻找VSD标志蛋白和发展VSD血清学诊断技术的有效工具。5、为了减少NTDs的发生,育龄妇女除了增补叶酸以外,还应避免暴露于某些环境危险因素。6、不同地区、不同人群MTHFR基因分布各有特点,存在明显的群体差异,检测得到广西健康人群的MTHFR基因C677位点突变分布可为今后优生保健的健康筛查工作提供依据。7、育龄妇女对叶酸和NTDs的知晓率较低,叶酸预防NTDs知识尚未得到很好的普及,叶酸利用率较低,通过健康干预使育龄妇女对NTDs的知晓率和叶酸的利用率均显著提高。