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干扰素(Interferon，IFN)是一类重要的家族性细胞因子，它们结构类似、功能接近，具有抵抗病毒感染、抑制肿瘤生长和免疫调节等多种生物学活性。干扰素有多种亚型，其中人干扰素α2b（Human Interferon alpha2b，HuIFNα2b）作为一种上市药物，被广泛用于慢性乙型肝炎、慢性丙型肝炎、恶性黑色素瘤等多种疾病的治疗，产生了良好的临床疗效和经济效益。 目前国内厂家生产的干扰素都是经过基因工程表达生产，并且以大肠杆菌表达为主。大肠杆菌表达的人干扰素α2b以包涵体的形式表达，包涵体产物需通过变性复性以及其后的纯化才能获得生物活性。干扰素复性得率低，纯化时需要经过四步色谱处理，工艺繁琐，成本高，而且无法去除未完全复性的中间产物，从而影响产品质量和疗效。本研究构建了原核表达质粒pET28a-IFNα2b，并转化进入大肠杆菌表达菌株BL21(DE3)进行表达。通过对诱导温度和蛋白抽提缓冲液这两个影响蛋白表达的因素进行优化，从而提高目的蛋白的可溶性。下游纯化采用两步离子交换层析的方法，简化了制备流程。结果表明L在20℃条件下，IFNα2b的可溶性比例由37℃条件下的8％提高到80％。经CM和DEAE两步离子交换层析柱纯化后，IFNα2b的纯度达到90％以上，产率为6.5mg/L，总的回收率为10.3％。本方法所表达的IFNα2b以可溶性形式存在于细菌裂解后的上清液中，不涉及包涵体的溶解、变性以及复性问题;同时，目的蛋白的纯化采用两步离子交换层析，相较于四步色谱法成本降低，生产周期缩短，易于推广。 IFNα2b的表达纯化经常面临如何去除二聚体的问题。之前的研究显示，溶液的盐浓度、pH以及蛋白浓度可能会影响IFNα2b二聚体的形成，因此，本文通过改变这三个因素的水平，对减小IFNα2b二聚体比例的条件做了初步探索。结果表明L降低蛋白浓度或者调节pH至4.5可以明显减少纯化结果中的二聚体比例;而NaCl浓度在100mM以下变化，或者pH在5.0～5.2之间变化时，对二聚体的比例影响不大。 人白细胞介素-2(Interleukin-2，IL-2)是由淋巴细胞产生的一类重要的细胞因子，具有多种与免疫功能强化有关的生物学活性，在临床上常用于肿瘤、免疫缺陷和一些感染性疾病的治疗。本研究构建了原核表达质粒pET28a-IL2并转入BL21(DE3)中进行表达。虽然尝试了多种诱导条件，但该重组质粒均未能正常表达IL-2蛋白;在更换多种原核表达载体后，IL-2依旧未能表达。虽然影响外源基因在大肠杆菌中表达的因素有很多，但是翻译起始区(Translation Initiation Region，TIR)的二级结构和密码子的选用是影响表达的重要因素。因此，本研究通过计算机模拟，在优化了TIR二级结构的基础上，将IL-2基因中的稀缺密码子替换为大肠杆菌偏爱密码子。经过优化的IL-2序列重新插入到pET28a载体中，成功实现了IL-2基因的表达。