晚期妊娠内皮素诱导的血管平滑肌收缩减弱与内皮素受体的相关性研究

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第一部分晚期妊娠与内皮素介导的血管平滑肌细胞收缩减弱的相关性研究目的探讨晚期妊娠与内皮素介导的血管平滑肌细胞收缩减弱之间的相关性。方法:分离晚期妊娠、非孕及中期妊娠大鼠主动脉VSMCs通过肾上腺素能受体激动剂去氧肾上腺素(PHE,10-3)、细胞膜去极化物氯化钾(KcL,51mmM)和内皮素(ET,10-7)作用于VSMCs,同时观察并记录VSMCs的收缩情况。结果:三组大鼠均成功分离出主动脉血管平滑肌细胞,ET, PHE和KCL刺激均可引起血管平滑肌收缩,晚期妊娠大鼠血管平滑肌细胞在受到ET、PHE和KCL刺激时的收缩强度均低于同组非孕及中期妊娠大鼠。结论:相比未孕及中期妊娠大鼠而言,晚期妊娠期间由内皮素诱导的血管平滑肌细胞收缩强度减弱。第二部分晚期妊娠大鼠内皮素介导的VSMC收缩与内皮素受体的相关性研究目的探讨ETAR及ETBR分别被阻滞后妊娠与非孕大鼠VSMC收缩的情况。方法分离晚孕、非孕及中孕大鼠的主动脉平滑肌细胞后,分别或同时对ETAR、 ETBR阻滞后再使用ET-1诱导,观察三组大鼠由ET-1诱导的VSMCs收缩情况。结果分别对ETAR、ETBR阻滞后用ET-1刺激,三组大鼠VSMCs的收缩强度均有不同程度的降低,晚孕大鼠与非孕及中孕晚期大鼠相比,收缩强度均相对减弱;同时对ETAR及ETBR阻滞后再加入ET,三组大鼠的主动脉VSMCs均未见明显收缩。结论:ETAR及ETBR单独与ET结合后,均可使VSMCs产生收缩作用;无论ETAR还是ETBR单独与ET结合发挥血管收缩作用,晚孕大鼠与非孕及中孕晚期大鼠相比,收缩强度均相对较弱。第三部分晚期妊娠ETAR及ETBR在主动脉及血管VSMCs的分布变化目的探讨晚期妊娠ETAR, ETBR在主动脉及血管平滑肌上的分布变化情况。方法分别使用H&E染色、免疫组化及细胞免疫荧光染色等方法观察晚期妊娠主动脉形态变化以及ETAR及ETBR在主动脉及VSMCs上的数量及分布变化情况。结果H&E染色晚孕大鼠的主动脉显示典型的细胞质和细胞外基质成分着红色细胞核呈蓝色改变,与未孕及中孕大鼠相比,晚孕大鼠主动脉壁厚度无明显差异;然内、中、外层在整个血管壁中所占的比率发生变化,主要表现为其中膜在血管壁中所占比率升高而外膜在血管壁中所占的比率相对降低;三组大鼠主动脉切片以ETAR及ETBR标记后行免疫组化染色均显示棕色,其中ETAR以中膜染色为主,与未孕及中孕大鼠的相比,晚孕大鼠染色程度较轻;ETBR在主动脉内膜及中膜均可见棕色染色,但以内膜染色为主,与未孕及中孕大鼠的相比,晚孕大鼠内膜染色较深而中膜染色较浅;三组大鼠主动脉以ETAR及ETBR标记后行细胞免疫荧光染色,VSMCs均被成功染色,与未孕及中孕大鼠的相比,晚孕大鼠ETAR及ETBR染色程度均较淡。结论晚期妊娠大鼠在主动脉及血管VSMC上,ETAR及ETBR的数量及分布都发生了变化。
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