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大鼠局灶性脑缺血再灌注VEGF表达的变化及羟基红花黄色素A的影响 目的 探讨Wistar大鼠局灶性脑缺血再灌注后脑组织内VEGF表达的变化及羟基红花黄素A(Hydaosafflow yellow A)的脑保护作用及机制。 方法 选择鼠龄3-4个月的雄性健康Wistar大鼠110只,体重250-300克,随机分为正常对照组、假手术组、局灶性脑缺血2小时再灌注0、1、3、6、9、12、24、72、小时,1周和2周组(简称再灌组)以及羟基红花黄色素A治疗后以上各时间点观察组(简称治疗组)共22组,每组5只。参考Longa等的方法,采用插线法制备大脑中动脉闭塞(Middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型,治疗组于造模成功后给予羟基红花黄色素A按6mg/kg舌下静脉注射。缺血2小时抽出拴线,造成再灌注。对照组不给予任何处理。假手术组仅插线1.5cm。分别于相应时间点麻醉动物,开胸给予10%甲醛主动脉灌注后开颅取脑,固定后从额极始行冠状切片,每2mm一层,按常规方法脱水、透明、浸蜡、包埋。取梗死最大层面(第三层)连续切片,分别行HE及免疫组化染色,镜下观察病理及免疫组化染色体变化。 VEGF试剂盒为兔抗体、鼠多克隆抗体,由博士德公司提供,采取SP法染色。 结果 (1)HE染色:对照组及假手术组光镜下神经元及组织结构无明显异常。再灌组缺血2小时再灌0-1小时即可见神经细胞变性,细胞周围水肿,再灌3-6小时可见神经元复层排列有明显缺失,神经细胞减少,神经元深染、核固缩或破碎,神经纤维走行不清或消失,组织内可见凝固性坏死灶。再灌12-24小时神经元变性坏死加重,软化灶明显扩大,小胶质细胞增生。再灌72小时以后组可见明显胶质细胞增生、斑痕形成。药物治疗组可明显减轻缺血性损伤,神经细胞变性和坏死损害明显减轻。与相应时间点比较可见软化灶明显缩小。(2)免疫组化染色:镜下观察显示对照组及假手术组小血管仅有少量内皮细胞呈免疫反应阳性表达,缺血2h再灌3h后可见缺血灶周围小血管内皮细胞表达开始增高,24-72h时表达量最高,1w后表达量开始下降,2w左右接近正常但仍偏高。对照组及假手术组锥体细胞及胶质细胞无表达。缺血2h再灌注3h锥体样细胞及胶质样细胞表达亦开始增加。在再灌9-12h时表达量最高,24-72h时表达量开始下降,1-2w时已未见表达。与再灌注组各时间段相比,药物干预组可使内皮细胞和脑实质细胞的VEGF表达量增加,并使缺血再灌后期VEGF降低过程减缓。 结论 (1)脑缺血再灌注后VEGF不但在内皮细胞上表达增高,在神经细胞和胶质细胞上的表达亦明显增高,但二者具有不同的时相。表明脑缺血后VEGF的表达通过不同的机制参与脑缺血的病理生理过程。(2)羟基红花黄色素A可明显的改善脑缺血后的