论文部分内容阅读
目的:角膜移植术后免疫排斥反应是导致手术失败的主要原因。提高角膜植片存活率，抑制免疫排斥反应的发生是亟待解决的问题。在研究免疫活性细胞间相互作用的分子机制过程中发现，部分细胞因子在移植术后引起的炎症反应，组织损伤和排斥反应中的作用至关重要。Interleukin-17(IL-17)是一种促炎症细胞因子，可以诱导趋化因子表达，白细胞浸润，并介导组织炎症反应，在自身免疫病中发挥致病作用。IL-17还参与了肾脏，心脏，肺脏和血管等多种器官的免移植疫排斥反应，但在角膜移植中的作用及其机制尚不明确。本试验的目的是明确IL-17在小鼠角膜移植术后免疫排斥反应中的作用，并进一步探讨抗小鼠IL-17单克隆抗体(mAb)对小鼠角膜移植排斥反应的治疗效果。
方法:建立小鼠角膜移植模型，术后部分小鼠应用real-time PCR和ELISA法分别检测受体角膜植片和受体脾脏中Th17/Th1相关细胞因子的表达。部分小鼠于角膜移植术后立即腹腔内注射抗小鼠IL-17中和性抗体或同型对照抗体，观察角膜植片生存情况，根据角膜移植后量化评分标准来评价植片的存活率及出现排斥反应的时间，并于不同时间点对植片进行病理学评价。应用免疫荧光组织化学染色法检测受体植片浸润细胞，并通过real-time PER对其定量。应用ELISA法分析Th1，Th2和Th17相关细胞因子在受体脾脏中的表达情况。最后，应用流式细胞术分析受体脾脏CD4+T细胞表达IL-17的定量变化情况。
结果:角膜移植术后7天，同种异基因角膜植片或脾脏中Th17相关细胞因子逐渐增加，14天表达达到高峰，而且比同种同基因角膜植片和脾脏表达明显增加。Kaplan-Meier生存分析显示，抗小鼠IL-17 mAb治疗后同种异基因角膜植片的存活时间明显延长。而且与对照组相比，中和性IL-17抗体明显改善同种异基因移植后角膜的损伤。此外，中和性IL-17抗体治疗后，受体植片中炎性浸润细胞(中性粒细胞，CD4细胞和CD8细胞)和受体脾脏中Th17相关细胞因子(IFN-γ，IL-12p40和IL-17)的产量明显比对照治疗组减少。虽然中和性IL-17抗体可以抑制脾脏CD4+T细胞表达IL-17，但是抗小鼠IL-17 mAb治疗组与对照治疗组间无明显的统计学差异。
结论:IL-17在同种异基因角膜移植排斥反应中起到促疾病发展的作用；应用抗小鼠IL-17单克隆抗体中和IL-17生物活性，通过抑制植片炎性浸润细胞的产量，减少促炎性细胞因子的分泌，从而在一定程度上抑制角膜移植排斥反应。这一发现可能为角膜及其他器官的免疫移植提供新的治疗方向。