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目的:检测LY294002作用于人源胃癌细胞株SGC7901后对细胞增殖凋亡及相关调控因子的影响,研究阻断P13K/Akt信号通路对胃癌的作用及机制。
方法:采用MTT法检测LY294002对SGC7901细胞的增殖抑制率;倒置显微镜观察SGC7901的细胞形态学改变;采用AnnexinV/PI双染流式细胞术分析SGC7901细胞凋亡细胞比例;RT-PCR检测 NAG-1、Skp2 mRNA的表达情况,western blot检测磷酸化Akt(p-Akt)和总Akt(t-Akt)的表达情况。
结果:LY294002可明显抑制SGC7901的生长,呈时间-剂量依赖性,50μmol/L的LY294002作用24h的增殖抑制率可达75%;SGC7901细胞在LY294002作用后出现典型的细胞形态学改变,部分细胞变圆漂浮,部分细胞固缩、分解,并出现细胞碎片;经10、30、50μmol/L的LY294002作用12小时后的凋亡率依次为(12.74±0.42)%,(36.5士0.45)%、(64.1士0.79)%,明显高于空白对照组的(2.3士0.36)%(P<0.01);LY294002可下调p-Akt的蛋白表达(P<0.05),而t-Akt未受影响;LY294002可上调NAG-1 mRNA表达,下调Skp2 mRNA表达,差异具有显著性(P<0.05)。
结论:LY294002能明显抑制胃癌细胞SGC7901的增殖,诱导细胞凋亡,其机制可能与其抑制Akt磷酸化阻断P13K/Akt信号通路,进而调控NAG-1、Skp2的mRNA表达水平有关。