论文部分内容阅读
高强度聚焦超声（High intensity focused ultrasound, HIFU）已成为多种实体肿瘤重要的辅助治疗方法之一，但单独使用HIFU治疗实体肿瘤复发率较高，这可能与HIFU消融不全的残余瘤有关。为进一步提高HIFU的治疗效果，降低复发率，人们尝试将HIFU与化疗相结合。然而，HIFU联合化疗虽可在一定程度上减少肿瘤复发，但传统的化疗静脉给药方式全身毒副作用较大，这限制了HIFU消融联合化疗在临床中的应用。生物可降解注射型原位凝胶植入剂（Injectable biodegradable in-situforming gel implant, ISFI）是近年来缓控释制剂领域的研究热点，该制剂具有制作工艺相对简单、可于病变部位局部给药、延长释药周期、减少药物不良反应等优点，在眼科和口腔科领域已有广泛应用，但该剂型用于肿瘤的治疗却鲜有报道。阿霉素（Doxorubicin, DOX）是临床常用的、蒽环类、广谱抗恶性肿瘤药,抗瘤疗效好。但该药毒副作用严重，限制了其在临床中的用药量。本实验通过制备载阿霉素液-固相变型原位凝胶植入剂（DOX凝胶），考察其体内外相变特性及体外释药特性，并用于HIFU不全消融兔VX2皮下肿瘤的治疗，以期能降低HIFU消融肿瘤后的肿瘤复发，为HIFU消融实体肿瘤后残余瘤的治疗提供新的思路和途径。目的：（1）制备载阿霉素液-固相变型原位凝胶（DOX凝胶），考察该凝胶的体内外相变情况及体外释药特性。（2）用DOX凝胶治疗HIFU消融兔VX2皮下肿瘤后的残余瘤，观察治疗效果，探讨DOX凝胶用于治疗HIFU不全消融实体肿瘤后的残余瘤的作用。方法：（1）选用聚乳酸乙醇酸共聚物（PLGA）为载体，N-甲基吡咯烷酮（NMP）为溶剂，阿霉素（DOX）为模型药物，制备DOX凝胶。采用高效液相色谱法测定其连续7天内的体外释药率；诊断超声成像观察DOX凝胶体内外相变过程。（2）建立兔VX2皮下移植瘤模型，HIFU不全消融后瘤内注射DOX凝胶进行治疗。空白组、对照组（HIFU+空白凝胶）及治疗组（HIFU+DOX凝胶）肿瘤治疗后第4和第8天，测量肿瘤大小，计算肿瘤体积和生长率，观察HE染色，免疫组化法和TUNEL法检测肿瘤细胞增殖和凋亡，Western Blot法检测肿瘤组织Bcl-2和Bax基因蛋白表达。结果：（1）成功制得DOX凝胶，该凝胶突释效应小，体外连续7天释药曲线平稳，累积释药率为78.92±4.68%，具有明显的缓释作用。体外，DOX凝胶遇水即发生相变，平均灰度值随时间逐渐增高，到第1天达最大值，之后逐渐减弱。其注射入肿瘤内立即呈现高回声，平均灰度值逐渐增高，到第4h达最高值，之后开始减弱。体内及体外相变中，植入物均不断膨胀，截面积逐渐增大，第7天达最大值。（2）治疗后第4天和第8天，治疗组肿瘤体积较其他两组小（P<0.05），差异有统计学意义。空白组肿瘤生长最快，平均生长率1.55（第四天）、3.11（第八天）；治疗组肿瘤生长最慢，平均生长率0.74（第四天）、0.77（第八天）。治疗组组织切片HE染色可见中心消融坏死区及周边少量肿瘤细胞残余。免疫组化及TUNEL检测结果示：治疗组细胞增殖指数较空白组和对照组低（P<0.05），而凋亡指数则较高（P<0.05）。WesternBlot结果显示Bcl-2基因蛋白在空白组和对照组肿瘤组织中呈强阳性表达，在治疗组呈低表达，组间比较存在统计学差异（P<0.05）。而Bax基因蛋白表达情况刚好与Bcl-2蛋白相反。结论：（1） DOX凝胶突释率较小，具有明显的缓释作用；其体内外相变考察显示具有液-固相变特性，可作为缓释原位植入剂的良好剂型。（2）DOX凝胶能有效治疗HIFU消融后的残余瘤，有望成为HIFU消融肿瘤后残余瘤治疗及预防复发的新手段。