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本研究采用防风种子作为外植体,获得无菌苗,采用正交设计,筛选防风组织培养各阶段的最适培养基,研究了(1)防风(Saposhnikovia divaricata (Turcz.)Schischk.)的组织培养及植株再生体系。(2)发根农杆菌(Agrobacterium rhizogenes)的生理生化法检测及分子生物学鉴定、生物活力大小比较。(3)发根农杆菌R10001对防风遗传转化条件的研究及发根体系的建立。结果如下:在无菌系建立时采用种子作为外植体,剥去种皮,纸桥法(1/2MS)播种,污染率可降至13.3%,出芽时间缩短到7d,出芽率达到65.2%(自然情况下防风出苗仅为50%,出芽时间40-60d不等),出芽率提高了15.2%,出芽时间提前了30-50d;防风叶片外植体在MS+2,4-D0.6+6-BA0.5(单位mg/L,下同)的培养基上7d即可见愈伤产生,出愈率达100%,较茎段、根、下胚轴外植体出愈率高,且愈伤组织块大,生长旺盛;愈伤组织增殖的最佳培养基为:MS+6-BA1.0+NAA0.6,30d后增殖倍数达到13.68倍,6-BA、NAA对愈伤组织增殖作用达到极显著水平。KT对愈伤组织增殖作用不显著;MS +NAA0.6+KT0.5+6-BA1.0是适合防风愈伤组织芽分化的最佳培养基,芽分化率达到70.0%;不定芽在MS+NAA0.4培养基上产生的根白色、较粗壮,生根率达100%,当根长至3~4cm、苗高5 cm左右时即可进行炼苗移栽。生理生化法检测供试的7个菌株,R1025、R1601、R10001为生物Ⅱ型发根农杆菌,与PCR检测结果(R10001、R1025、R1601在540bp、770 bp附近有明显条带)相一致。YEB液体培养基培养15h时,菌株密度(OD600)大小依次为R1601>R10002 >LBA9402>ATCC15834>R1025> R10001>A4。利用黄瓜刚展开子叶测定供试菌株的遗传转化活力,结果显示R10001的遗传转化率最高,达到59.0%,外植体生根数平均4.21条。除菌抗生素的选择以Cef 400mg/L为宜。防风发根诱导适宜外植体为幼叶,预培养培养基采用MS +2,4-D0.6+6-BA0.5+AS30,侵染前超声波处理适宜时间为4s,侵染后共培养适宜天数为2d,发状根诱导率可达62.9%。将除至无菌的防风发状根用MS液体培养基培养,测定生长曲线,在5～20d生长很快,随着培养时间延长,35d以后,发状根褐化严重,至35～40d发根生长进入平台期,增长缓慢。防风发根在MS+2,4-D0.6+6-BA0.5的培养基上可形成愈伤组织,而在添加NAA0.6mg/L、KT0.5 mg/L和6-BA1.0 mg/L部分愈伤组织能分化出不定芽。