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第一部分眼镜蛇神经毒素对人肺腺癌A549细胞生长抑制作用研究目的观察眼睛蛇神经毒素(cobrotoxin)体外抗肿瘤作用,并探讨其相关机制。方法以人肺腺癌A549细胞(野生型P53,wild-typeP53,wtP53)为实验对象。通过四氮唑盐还原法(MTT)检测眼镜蛇神经毒素(cobrotoxin)对人肺腺癌A549细胞和HFL1人肺成纤维细胞的生长抑制率;应用细胞集落平板克隆实验检测cobrotoxin对A549细胞的集落形成的影响;应用透射电镜观察cobrotoxin作用后自噬的发生;蛋白免疫印迹法(Western blot)测定单独cobrotoxin作用、cobrotoxin分别联合3-MA(3-methyladenine,3-甲基腺嘌呤,自噬抑制剂)抑制自噬和SB203580(吡啶咪唑化合物,P38信号转导通路特异性抑制剂)抑制P38-MAPK通路活性后A549细胞内Beclin-1、LC3、P62、P38及pP38等蛋白表达水平。结果MTT结果显示不同浓度cobrotoxin对A549细胞的生长均有明显抑制作用,对HFL1人肺成纤维细胞无显著抑制作用;不同浓度cobrotoxin可明显抑制A549细胞的集落形成;cobrotoxin作用后透射电镜可观察到cobrotoxin组较对照组自噬小体明显增多,3-MA、SB203580分别干预后自噬小体有所减少;cobrotoxin作用后Beclin-1、pP38、Ⅱ型LC3蛋白表达水平明显提高,P62表达明显降低,并有浓度依赖性,3-MA抑制自噬后Beclin-1、Ⅱ型LC3蛋白表达水平降低,P62表达增高,SB203580抑制P38-MAPK通路后Beclin-1、pP38、Ⅱ型LC3蛋白表达水平降低, P62表达增高结论cobrotoxin对人肺癌A549细胞体外生长有抑制作用,其作用与诱导自噬有关,其中诱导自噬作用可能和活化P38-MAPK通路有关。第二部分眼镜蛇神经毒素对人肺腺癌A549细胞裸鼠移植瘤生长抑制作用目的观察眼睛蛇神经毒素(cobrotoxin)对人肺腺癌A549细胞(wtP53)裸鼠移植瘤生长抑制作用,及探讨自噬对cobrotoxin的肿瘤抑制作用的影响。方法接种人肺腺癌A549细胞建立裸鼠移植瘤模型,分40ug/kg cobrotoxin组、40ug/kg cobrotoxin+10mmol/kg3MA组、40ug/kg cobrotoxin+5mg/kg SB203580组和阴性对照组4组,按以上规定剂量在移植瘤周围皮下注射cobrotoxin,隔日注射一次,共注射10次,同时阴性对照组动物移植瘤周皮下注射等量生理盐水。给药4周后,比较移植瘤瘤重,计算抑瘤率。结果cobrotoxin对人肺癌A549细胞裸鼠移植瘤生长有抑制作用,抑瘤率为35.7%(cobrotoxin40μg/kg组),3-MA(10mmol/kg)、SB203580(5mg/kg)干预后抑瘤率有显著下降。结论cobrotoxin对人肺腺癌A549细胞裸鼠移植瘤有生长抑制作用,其抑制作用可能与诱导自噬和活化P38-MAPK通路有关。