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蜱是常见的人和动物体表寄生虫,作为嗜血性节肢动物,蜱在分类学上属于节肢动物门、蛛形纲、蜱螨目、蜱总科,其生活史复杂,繁殖率高,经历卵、幼虫、若虫、成虫四个发育阶段,属于不完全变态发育。作为多种人兽共患病病原的储存宿主和传播媒介,蜱可传播和感染病原引发原虫病、森林脑炎、新疆出血热、回归热、莱姆病、Q热、立克次体病等。威胁人类健康,对畜牧经济发展带来巨大危害。因此,预防和控制蜱的传播十分重要。镰形扇头蜱属于硬蜱的一种,广泛分布于我国长江以南,是我国南方的优势蜱种。目前对杀蜱除蜱的主要方法是化学药物杀灭,这种方法对蜱的杀伤效果虽好,但环境污染严重,毒性药物对宿主危害性大,随着生物技术研究的深入,新型环保的预防控制蜱的策略不断发展,如抗蜱疫苗研究等,但还未取得成功,新的防治技术需求还十分迫切。RNA干扰技术作为新兴的研究技术,在蜱研究中得到广泛应用。本实验室已克隆鉴定了镰形扇头蜱抗凝血分子Rhipilin-1,并发现通过显微注射证明RNA干扰该基因可有效降低蜱的吸血能力。本研究根据RNA干扰原理,将Rhipilin-1dsRNA直接浸泡蜱体,通过脂质体浸染传递途径达到RNA干扰效果,从而实施如杀虫剂灭蜱的新型防治技术:其一,以重组质粒pGEM-T-Rhipilin-1和pGEM-T-Luciferase为模板,根据T7试剂盒的操作说明,在蜱体外合成目的基因Rhipilin-1dsRNA和对照基因Luciferase dsRNA;其二,在浸泡过程中筛选蜱各阶段最佳脂质剂、浸泡时间以及dsRNA与脂质剂浸泡比例并通过荧光标记dsRNA的浸泡观察dsRNA分布;其三,以最佳脂质剂、浸泡时间、浸泡比例对镰形扇头蜱幼蜱、若蜱和成蜱三个阶段浸泡,以Luciferase基因的dsRNA作为对照,进行动物体实验观察。结果显示,最佳浸泡条件筛选为幼蜱脂质剂Lipofectamine 2000、浸泡24h、dsRNA与脂质剂体积比为2:1;若蜱脂质剂DMRIE-C、浸泡12h、dsRNA与脂质剂体积比为1:1;幼蜱脂质剂DMRIE-C、浸泡12h、dsRNA与脂质剂体积比为1:2;荧光dsRNA进入蜱体;浸泡后的镰形扇头蜱饱血时间显著增长,饱血体重显著减少,即对镰形扇头蜱原有生物学功能产生显著影响。因此,可将Rhipilin-1基因作为杀蜱剂的候选基因,这为RNA干扰方法学在蜱防控实践应用以及新型环保的杀蜱剂的创制提供基础。