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大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)是导致畜禽感染的主要致病菌之一。近年来,由乳腺致病性大肠杆菌(mammary pathogenic Escherichia coli,MPEC)和禽致病性大肠杆菌(avian pathogenic Escherichia coli,APEC)引起的奶牛乳腺炎、禽大肠杆菌病的发病率呈逐年上升趋势,给世界范围内畜禽相关的蛋奶肉生产造成重大经济损失。抗生素治疗是防治畜禽源致病性大肠杆菌的重要手段,但抗生素滥用已经导致致病性大肠杆菌的耐药谱不断扩大,耐药水平不断提高,并表现出严重的多重耐药性。目前亟待揭示致病性大肠杆菌多重耐药性的分子机制及调控因素。研究表明群体感应系统、双组份系统和转录调节子等调控系统在耐药基因表达以及对抗来自宿主及宿主以外的杀菌作用中发挥了重要作用。本研究基于群体感应系统、双组份系统和转录因子蛋白探求上述调控单元对畜禽致病性大肠杆菌耐药性的调控机制。主要研究结果如下:1、在禽致病大肠杆菌APECX40中,Qse BC双组份系统调控抗生素耐药性及生物被膜的形成Qse BC双组份系统通过调节外排泵抑制子acrR,外排泵激活子marA和外排泵相关基因acrA、acrB、acrD、emrD和mdtH的转录来影响抗生素耐药性;并通过上调APECX40生物被膜形成相关的基因bcs A、csgA、fliC、motA、wcaF和fimA的转录促进APECX40生物被膜的形成。2、在奶牛源大肠杆菌ECDCMC2中,QseBC双组份系统调控抗生素耐药性及生物被膜的形成Qse B蛋白通过直接与ECDCM2中marA的启动子结合,激活外排泵激活子Mar A的表达,调控外排泵acrA和acrB的转录;此外,QseBC双组份系统通过上调ECDCM2生物被膜形成相关的基因bcsA、csgA、fliC、motA、wcaF和fimA的转录促进ECDCM2生物被膜的形成。3、在禽致病大肠杆菌APECX40中,转录因子McbR调控抗生素耐药性转录因子McbR通过直接与acrAB、acrD、acrR、emrD和mdtD启动子区域结合来激活这些基因的表达,进而增强了APECX40对林可霉素类(克林霉素、林可霉素)、头孢类(头孢噻肟、头孢氨苄)、四环素类(多西环素、四环素)、氨基糖苷类(庆大霉素、卡那霉素)、喹诺酮类(诺氟沙星、氧氟沙星)、大环内之类(红霉素)和利福平等12种抗生素的耐药性。4、在奶牛源大肠杆菌ECDCMC2中,RcsBC和AriR调控细菌抗生素耐药性及H2O2应激效应,并对RcsBC和AriR之间的相关性进行探索Rcs BC双组份系统增强了ECDCM2对卡那霉素、诺氟沙星和环丙沙星的耐药性;AriR降低了ECDCM2对卡那霉素的耐药性;但是,AriR降低了H2O2应激效应;此外,β-半乳糖苷酶酶活测定试验表明RcsBC和AriR之间没有调控关系。综上所述,本研究通过细菌存活率检测实验、体外生物被膜形成实验、H2O2应激效应等表型检测手段以及β-半乳糖苷酶活性测定试验、反转录实时荧光定量PCR、凝胶阻滞实验、转录组测序等分子检测手段详细阐述了QseBC双组份系统、RcsBC双组份系统和转录调节蛋白McbR、AriR调控畜禽致病性E.coli耐药性的分子机制。因此,本研究可为防治畜禽致病性E.coli的感染提供理论依据与潜在药靶。