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目的:研究一种新的转移抑制基因--Raf kinase inhibitor protein(RKIP)因对宫颈癌侵袭转移的影响及其对可能的机制进行探讨。 方法:应用免疫组织化学SP法及Westernblot法分别对宫颈的组织标本(正常宫颈组织45份,宫颈上皮内瘤变组织60份,宫颈癌组织105份,宫颈癌伴淋巴结转移者40份)及宫颈癌细胞系中RKIP基因的表达情况进行检测。将上调和下调RKIP表达的载体导入RKIP表达水平中等的宫颈癌细胞系Hela,转染后细胞进行双层软琼脂集落形成实验、体外黏附实验、体外侵袭实验、流式细胞仪检测细胞周期等观察RKIP基因对宫颈癌细胞生物学行为的影响,并采用Westernblot检测Iκ B和pIκ B表达水平的变化。 结果:(1)45份正常宫颈组织60份宫颈上皮内瘤变组织中RKIP的表达均以阳性(32份,71.1%;32,53.3%)、弱阳性(7份,15.6%;16,26.7%)为主,105份宫颈癌组织RKIP的表达以阴性(58份,55.2%)、弱阳性(31份,29.5%)为主,而40份宫颈癌伴淋巴结转移者RKIP的表达以阴性(33份,82.5%)为主。(2)RKIP表达水平上调的细胞的增殖能力明最低于。RKIP表达水平下调的细胞(P<0.01)。(3)锚定非依赖性生长能力:RKIP表达水平上调的细胞的集落形成数(80.3±13.2)较其对照组载体转染细胞(111.5±15.2)明显减少,分别比较,差异均有统计学意义(P<0.0I)。(4)体外黏附能力:RKIP表达上调组(pCMV6-RKIP-Hela)细胞的体外黏附能力(65.5±1.3)%明显低于未转染细胞,而RKIP表达下调组(siRNA-RKIP-Hela)细胞的体外黏附能力(145.5±2.3)%明显高于未转染细胞,差异均有统计学意义(P<0.01)。(5)体外侵袭能力:RKIP表达上调组(pCMV6-RKIP-Hela)细胞的穿膜细胞数(32±3)明显低于未转染细胞,而RKIP表达下调组(siRNA-RKIP-Hela)细胞的穿膜细胞数(214±10)明显高于未转染细胞,差异均有统计学意义(P<0.01)。(6)pCMV6-RKIP-Hela细胞呈现G1期细胞阻滞,G2+S期细胞比例下降,而siRNA-RKIP-Hela细胞则呈G1期细胞比例减少和G2+S期细胞比例增加。(7)与未转染细胞相比,转染siRNA空白对照组(siRNA-空白对照序列-Hela)和转染pCMV6质粒组(pCMV6-Hela)的Iκ B表达水平变化不大;RKIP表达上调组(pCMV6-RKIP-Hela)细胞的p-Iκ B蛋白表达水平则下调,相对表达含量别为0.35,RKIP表达下调组(siRNA-RKIP-Hela)细胞的p-Iκ B蛋白表达水平则上调,相对表达含量别为1.75,差异均有统计学意义(P<0.01)。 结论:RKIP对宫颈癌细胞的侵袭、转移有抑制作用,并对其生长也有抑制作用。