论文部分内容阅读
目的：观察淫羊藿苷（Icariin，ICA）对人肝癌HepG2细胞增殖、细胞周期及细胞凋亡的影响，探讨其作用机制。 方法：不同浓度淫羊藿苷（0、12.5、25、50、100、200μg/mL）干预人肝癌HepG2细胞，倒置显微镜观察细胞形态变化，MTT法测定24、48、72h时间点细胞增殖变化，流式细胞术分析48h细胞周期变化，Hoechst 33258染色法观察48h细胞凋亡情况，Annexin V-FITC/PI双染法检测48h细胞凋亡率；Western blot法检测48 h细胞凋亡线粒体途径相关Caspase-3、Caspase-9、Bcl-2和Bax蛋白表达变化。 结果：1.淫羊藿苷抑制人肝癌HepG2细胞增殖：MTT结果表明，12.5、25、50、100、200μg/mL的淫羊藿苷可明显抑制HepG2细胞增殖，与对照组相比，有统计学差异（P＜0.05），且随浓度升高，抑制作用增强（P＜0.05）。经淫羊藿苷干预HepG2细胞48h后倒置显微镜下观察发现：细胞贴壁性差，细胞形态不规则，数量减少，部分细胞形态变圆；2.淫羊藿苷可诱导HepG2细胞周期阻滞：通过PI染色后流式细胞仪测定结果提示25、50、100μg/mL的淫羊藿苷干预HepG2细胞48h，细胞周期G0/G1细胞明显增多（P＜0.05），50、100μg/mL干预的细胞S期和G2/M期细胞明显减少（P＜0.05）。3.淫羊藿苷可诱导HepG2细胞凋亡：经12.5、25、50、100、200μg/mL的淫羊藿苷作用于HepG2细胞48h后，Hoechst 33258染色结果显示随着药物浓度增加，细胞凋亡有明显变化；25、50、100μg/mL淫羊藿苷作用细胞48h后，Annexin V-FITC/PI检测结果显示其细胞总凋亡率分别为6.33%±0.78%、16.06%±1.22%、22.38%±1.83%，与对照组比较有统计学差异（P<0.05），并随剂量增加，凋亡增加（P<0.05）。4.Western blot：25、50、100μg/mL淫羊藿苷作用于HepG2细胞48h后，促凋亡蛋白Bax上调，抗凋亡蛋白Bcl-2表达下调，Bax/Bcl-2的比值上升，与对照组比较均有统计学意义（P<0.05）；细胞凋亡信号因子Caspase-3、Caspase-9表达上调，50、100μg/mL与对照组相比有统计学差异（P<0.05）。 结论：1.淫羊藿苷可抑制人肝癌HepG2细胞增殖，并使细胞周期在G1期停滞。2.淫羊藿苷可诱导人肝癌HepG2细胞凋亡，促使Bax/Bcl-2蛋白表达比值上调，促使Caspase-3、Caspase-9蛋白表达上调，提示淫羊藿苷诱导HepG2凋亡机制和线粒体凋亡途径密切相关。