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背景:我国是胃癌高发国家,胃癌发病率和致死率均位居我国肿瘤发病和死亡率前列,血管生成拟态是近年来新发现的血管生成形式,与胃癌的不良预后密切相关,而乏氧微环境是促进肿瘤血管生成拟态形成的主要因素之一,且与瘀毒互结证关系密切。抗癌名方西黄丸具有活血解毒功效并对多种肿瘤具有抑制作用,我们推测,具有解毒活血功效的西黄丸抑制肿瘤的可能机制是通过调控乏氧微环境进而抑制肿瘤血管生成拟态来实现的。目的:明确西黄丸调控乏氧微环境进而抑制肿瘤血管生成拟态形成的相关机制,探索西黄丸抗肿瘤的内在靶标,丰富活血解毒法治疗肿瘤的内涵。方法:(1)实验分组:空白组、西黄丸组、HIF-1α抑制剂(2-ME)组、结合组;(2)体外采用人胃癌MGC-803细胞系,CCK-8法检测西黄丸对肿瘤细胞增殖的抑制作用,AV-PI法检测西黄丸对肿瘤细胞凋亡的影响,RNA酶法检测西黄丸对肿瘤细胞周期的影响,体内实验采用Balb/c裸鼠建立MGC-803移植瘤模型,观察和测量西黄丸对裸鼠移植瘤肿瘤体积和质量的影响;(3)使用低氧工作站建立乏氧细胞培养模型、通过三维培养建立体外肿瘤细胞拟态血管模型,体外实验通过显微镜下管道计数、体内实验通过PAS-CD31免疫化学-免疫组化双染色法计算各组管道形成数目。(4)体内实验采用 RT-qPCR、Western-blot,体外实验采用 RT-qPCR、Western-blot、IHC法检测血管生成拟态相关蛋白VE-Cadherin、EphA2、MMP-2蛋白及mRNA表达、p-EphA2蛋白表达、HIF-1α、Twist1蛋白及mRNA表达情况。(5)HTA2.0芯片筛选西黄丸抗肿瘤和调控乏氧通路相关基因,并进行RT-qPCR验证。结果:(1)西黄丸可以抑制MGC-803细胞增殖,并呈浓度和时间依赖性,IC50:24h为50.424μg/ml,48h为35.129μg/ml,72h为28.191μg/ml,并抑制裸鼠移植瘤肿瘤的生长。同时,西黄丸可以促进MGC-803细胞凋亡,并将其细胞周期阻滞在G0/G1期。(2)建立体外和体内MGC-803细胞拟态管道形成模型,西黄丸可以显著抑制体外乏氧条件下和体内MGC-803拟态管道的形成,与2-ME的抑制作用相近,结合组对拟态管道形成的抑制作用最强。(3)西黄丸、2-ME、结合组可以降低体内和体外VE-Cadherin、MMP-2的mRNA表达,可以降低体内和体外VE-Cadherin、MMP-2的蛋白表达及p-EphA2的表达,结合组可以更显著的降低如上蛋白的mRNA和蛋白的表达。结合组可以降低EphA2的mRNA的表达,但不能显著影响其蛋白的表达;西黄丸、2-ME、结合组对EphA2蛋白和mRNA的表达没有显著影响。西黄丸、2-ME、结合组可以降低体外HIF-1α的mRNA和蛋白表达,降低Twist1的mRNA表达;在体内降低HIF-1α和Twist1的mRNA及蛋白表达。(4)HTA2.0基因芯片筛选西黄丸可能的作用通路靶点,发现西黄丸可以显著下调628个基因表达,上调88个基因表达。显著下调9个lncRNA表达,上调11个lncRNA表达,并对54条信号通路具有显著影响。结合前述研究结果选取乏氧信号通路和细胞周期信号通路进行验证,发现西黄丸可以降低HIF-1α上有蛋白mTOR表达,促进翻译后修饰蛋白PHD2、VHL蛋白基因表达,降低细胞周期相关蛋白(SMC3、CDC25c、CDC6、MCM3)基因的表达水平。结论:西黄丸可以通过(1)抑制乏氧相关mTOR-HIF-1α-Twistl信号通路,(2)促进乏氧相关蛋白PHD2、VHL表达,(3)抑制血管生成拟态相关蛋白VE-Cadherin、MMP-2表达及EphA2蛋白磷酸化,(4)抑制SMC3、CDC25c、CDC6、MCM3等细胞周期相关基因表达从而抑制人胃癌MGC-803细胞增殖及血管生成拟态形成的。