【摘 要】
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目的:拟从黄酮类化合物中,筛选若干对重组人CK2全酶及对HL-60细胞内的CK2全酶有直接抑制作用的,且具有抗肿瘤活性的化合物.方法:以重组人CK2全酶为分子靶点,观察受试化合物对
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目的:拟从黄酮类化合物中,筛选若干对重组人CK2全酶及对HL-60细胞内的CK2全酶有直接抑制作用的,且具有抗肿瘤活性的化合物.方法:以重组人CK2全酶为分子靶点,观察受试化合物对其活性的影响,CK2活性通过测定转移到CK2底物上的[γ-<32>p]ATP的[<32>p]放射性活度来检测,筛选出CK2的抑制剂;分别改变两种CK2底物(酪蛋白和ATP)的浓度,对CK2的抑制剂进行动力学分析,计算表观K<,m>、V<,max>以及K<,i>,并判断其抑制类型;将体外筛选到的四种CK2的抑制剂——藤黄菌素、山萘黄素、黄芩素和大豆黄酮作为受试药物,以人早幼粒白血病细胞HL-60为研究对象,通过使用CK2的特异性多肽底物检测药物对细胞内CK2活性的影响,从而筛选出细胞内的CK2抑制剂;分别用MTT法、台盼蓝拒染法观察药物对细胞增殖的影响,RT-PCR观察药物对CK2各亚基mRNA表达的影响,流式细胞术观察药物对细胞周期的影响以及凋亡情况.结论:从黄酮类化合物中筛选到4种对重组人CK2全酶具有明显抑制作用及2种对细胞内的CK2全酶有直接抑制作用的化合物.藤黄菌素和山萘黄素对HL-60细胞增殖及细胞周期的影响可能与CK2有关.
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