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本研究以H3N2亚型猪流感病毒株SIV—H3N2株和H1N1亚型猪流感病毒株SIV—H1N1株为种毒制备双价灭活油乳剂疫苗，并对其安全性、抗体消长规律、攻毒保护效果等进行了评价。结果表明，该疫苗的推荐免疫剂量对小鼠和仔猪安全。小鼠免疫后第3周，抗H3和H1亚型SIV的HI抗体滴度分别达到1:196和1：462。在首免后第4周二免，至二免后第8周时两种HI抗体滴度均保持在1:160以上。攻毒试验结果显示，首免后第3周，对小鼠攻毒，免疫鼠肺脏病毒量明显减少、病变减轻，且脾脏等组织分离不到病毒。仔猪免疫后第4周，抗H3和H1亚型SIV的HI抗体滴度分别为1：268和1:161；首免后第4周进行二免，至二免后第8周时两种HI抗体滴度仍保持在1:160以上；母猪免疫后第4周，抗H3和H1亚型SIV的HI抗体滴度分别为1：214和1:1215；首免后第4周进行二免，至二免后第16周时抗H3和H1亚型SIV的HI抗体滴度分别保持在1：80和1:160以上。攻毒保护试验结果显示，当仔猪体内抗H3亚型SIV特异性HI抗体滴度≥1：80，或抗H1亚型SIV特异性HI抗体滴度≥1:160可完全保护机体免受同亚型病毒的攻击。
本研究还对共表达H3和H1亚型SIV HA基因的重组腺病毒rAd—H3—H1株进行了鉴定和免疫效果评价。结果表明，重组腺病毒rAd—H3—H1能够在培养细胞中顺利表达H3和H1亚型SIV的HA基因。该重组腺病毒rAd—H3—H1在AD—293细胞上连续传30代，其感染滴度保持稳定。用实时荧光定量PCR方法间接证明重组腺病毒rAd—H3—H1中H1—HA基因在体外表达效率约是H3—HA基因的12％～17％。检测该重组腺病毒rAd—H3—H1的安全性和免疫效果后发现，评价结果表明，小鼠和仔猪超剂量接种rAd—H3—H1病毒后无不良反应；小鼠免疫后3w产生的抗H3—HA和H1—HA蛋白特异性HI抗体滴度分别达到1：769和1：412。当用与首免等剂量的重组腺病毒rAd—H3—H1和5倍于首免剂量的重组腺病毒rAd—H3—H1以及本研究制备的H3+H1双价油乳剂和首免后第4周分别对小鼠进行二免，至二免后第8周时抗H3—HA蛋白特异性HI抗体仍分别保持在1:160、1：320和1:1280以上，而抗H1—HA蛋白特异性HI抗体则分别保持在1：40，1:160，1：2560以上。检测还发现接种重组腺病毒rAd—H3—H1后，可以促进机体分泌IFN—γ；首免后3w对小鼠攻毒，免疫鼠肺脏病毒量明显减少、病变减轻，且脾脏等组织分离不到病毒。重组腺病毒rAd—H3—H1对仔猪进行两次免疫(间隔4w)，二免后8w，免疫猪体内抗H3—HA蛋白特异性HI抗体滴度均保持在1：80以上，而抗H1—HA蛋白特异性HI抗体滴度均在1：80以下。