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目的:主要研究刺糖多糖(polysaccharide from Saccharum Alhagi)对小鼠体内及体外免疫活性,并探讨其对TLR4靶点的免疫活性作用机制。方法:1.建立C57小鼠免疫抑制模型的构建,小鼠用AP1-1进行灌胃,测定小鼠血清中的细胞因子IL-1β、IL-2、IL-4、IL-6、IL-12、TNF-α、LgG和LgM的生成水平来评价AP1-1的免疫活性。2.采用RT-PCR和Western Blot法检测小鼠组织中TLR4受体的表达。3.用Western Blot法检测TLR4受体抑制剂对巨噬细胞RAW264.7的封闭表达。4.采用MTT法考察刺糖多糖AP1-1、AP1-2对巨噬细胞RAW264.7免疫缺陷模型的增殖活性。5.用ELISA试剂盒测定经刺糖多糖AP1-1干预后,巨噬细胞免疫缺陷模型的细胞因子IL-1β、IL-2、IL-12、TNF-α、NF-κB的调节水平。6.采用RT-PCR和Western Blot法检测刺糖多糖AP1-1对巨噬细胞RAW264.7免疫缺陷模型中的MyD88、TRAF6、TRAM、TRIF的表达调控。结果:1.根据ELISA试剂盒测定结果所示,IL-2、IL-12、TNF-a和LgG含量均比阳性药组的含量显著增高,差异有统计学意义(P<0.05)。2.运用RT-PCR和Western Blot法检测小鼠组织中TLR4受体的表达,其结果一致,且具有剂量相关性。3.蛋白印迹法Western Blot结果表明,刺糖多糖给药干预最佳时间为第一至三天。4.MTT法测定刺糖多糖AP1-1对巨噬细胞RAW264.7免疫缺陷模型的增殖活性优于AP1-2,刺糖多糖AP1-1质量浓度在25~100μg/mL对巨噬细胞RAW264.7免疫缺陷模型的存活有明显的促进作用(P<0.05)。5.采用ELISA试剂盒测定刺糖多糖AP1-1各剂量组能干预巨噬细胞RAW264.7模型分泌IL-1β、IL-6、IL-12、NF-κB,并随着刺糖多糖AP1-1剂量的增加而增加,差异有统计学意义(P<0.05)。6.蛋白印迹法Western blot试验结果证明不同浓度刺糖多糖AP1-1干预巨噬细胞RAW264.7免疫缺陷模型24 h后,通过TLR4受体的MyD88依赖途径MyD88和TRAF6进行表达调控,在质量浓度为50、75μg/mL时明显上调(P<0.05)。结论:1.刺糖多糖AP1-1能增强免疫抑制模型小鼠的体内免疫功能。2.刺糖多糖AP1-1能够促进巨噬细胞RAW264.7免疫缺陷模型的增殖以及对其免疫活性有良好的影响。3.刺糖多糖AP1-1对巨噬细胞RAW264.7免疫缺陷模型的细胞因子IL-1β、IL-6、IL-12、NF-κB的分泌有促进作用。4.Western blot结果显示,刺糖多糖通过MyD88依赖途径从而激活TLR4受体的免疫应答。