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三角帆蚌(Hyriopsis cumingii)属于中国特有种,它是我国珍珠产量最高的淡水珍珠蚌,并且其珍珠产量占全球淡水珍珠产量的八成。三角帆蚌的贝壳及其所产珍珠都属于生物矿物,研究这些生物矿物的具体形成过程,对珍珠品质的提升有着至关重要的作用。本实验在三角帆蚌中鉴定克隆了2个的生物矿化过程中基质蛋白基因hic09和hc-upsalin。 1. 对hic09和hc-upsalin基因进行了克隆、序列分析、结构预测、组织荧光定量表达分析、原位杂交以及各时期珍珠囊组织荧光定量等实验。RACE实验后拼接得到hic09基因序列片段,得到全长为662bp的核酸序列,该序列含一个长为303bp的开放阅读框,编码了由100个氨基酸组成的蛋白质,成熟蛋白为弱酸性,理论等电点(PI)为6.466,理论分子量为8.651 KD。在Genebank里没有同源性的蛋白,这是一个在三角帆蚌中新发现的蛋白。Hc-upsalin基因是一段全长为553bp的核酸序列,该序列含一个长为360bp的开放阅读框,编码了由119个氨基酸组成的蛋白质,其等电点(PI)为6.93,分子量为11.4 KD。hc-upsalin与来自Unio pictorum的已知基质蛋白upsalin具有高度的序列同源性。 2. hic09基因组织半定量结果显示其在外套膜组织中的表达量最高,原位杂交的结果显示hic09在外套膜外褶的外表皮各部分都有信号,在壳皮沟中同样有信号,表明hic09是一个参与了贝壳角质层、棱柱层和珍珠层的多功能基质蛋白。在无核珍珠插片实验中,hic09基因在晶体成核和有序沉积阶段出现高表达,推测hic09参与调控珍珠珍珠层生长形成过程。在RNA干扰实验结果显示hic09基因参与贝壳矿化过程中棱柱层的形成,并对贝壳珍珠层矿化有影响,可能与珍珠层晶体结晶、生长有关。 3. hc-upsalin组织半定量结果显示其在外套膜组织中特异性表达,原位杂交信号主要在外套膜外褶外侧中部和缘膜部,表明hc-upsalin是一种珍珠层基质蛋白。在无核珍珠插片实验中,hc-upsalin基因在晶体成核和有序沉积阶段出现高表达,推测hc-upsalin参与调控珍珠珍珠层生长形成过程。