铁是植物生命活动必需的微量元素之一,土壤中有效铁含量较低,易导致植物缺铁。bHLH转录因子家族在植物体内发挥重要的调控作用,有bHLH转录因子参与植物缺铁响应。本研究从紫花苜蓿中克隆得到MsbHLH115基因,构建pBI121-MsbHLH115植物表达载体转入烟草中,并对MsbHLH115基因的表达模式进行了初步研究,取得的主要研究结果如下:1.MsbHLH115基因的克隆与序列分析根据紫花苜蓿铁胁迫下转录组测序序列设计克隆引物,利用RT-PCR方法克隆获得MsbHLH115基因,该基因全长为780 bp,编码259个氨基酸。MsbHLH115蛋白含有一个HLH结构域。经NCBI protein BLAST分析,发现MsbHLH115与MtbHLH115氨基酸相似性为96%。通过对MsbHLH115氨基酸序列的预测和生物信息学分析,构建了三级结构模型和系统进化树。2.MsbHLH115植物表达载体构建构建了pBI121-MsbHLH115植物表达载体,含有Ca MV35S启动子和卡那霉素(Km)抗性。3.MsbHLH115基因对烟草的遗传转化将pBI121-MsbHLH115重组质粒转入到GV3101感受态中,利用叶盘法将MsbHLH115转化至模式植物烟草中,PCR鉴定获得2株转基因阳性苗。4.MsbHLH115基因的表达特性qRT-PCR检测了MsbHLH115基因在不同非生物胁迫下的紫花苜蓿中的相对表达量。发现MsbHLH115基因受高铁缺铁胁迫强烈诱导表达,主要的表达部位是根部,茎、叶中表达量极低;MsbHLH115基因响应盐胁迫下调表达、响应碱和干旱胁迫上调表达,响应ABA上调表达,不响应茉莉酸甲酯。