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高迁移率族蛋白1(HMGB1)主要由免疫细胞(如巨噬细胞、单核细胞、中性粒细胞)、成纤维细胞及内皮细胞分泌。胞外HMGB1作为一种促炎因子,通过分子相关模式,招募与其相关的炎性细胞启动机体固有免疫,与多种肺部疾病(如哮喘、COPD、急性呼吸窘迫综合征、肺炎、肺损伤以及肺癌)的发生发展相关。目前,有关HMGB1在结核分枝杆菌感染性疾病中的研究仍较少。本研究旨在检测HMGB1及其相关炎症因子IL-6、IL-10和TNF-α在肺结核患者血浆和痰液中的含量,并分析HMGB1与炎性因子、固有免疫细胞等的关系,为结核病的预防、诊断及临床治疗提供理论依据。 [目的] 检测活动性肺结核患者血浆和外周血中HMGB1、IL-10、IL-6及TNF-α的水平,并分析它们之间有何种关系,探讨HMGB1、IL-10、IL-6及TNF-α与患者外周血中单核细胞的相关性;体外实验通过检测BCG刺激PMA诱导的THP-1细胞后,HMGB1、IL-10、IL-6及TNF-α的表达,进一步证实HMGB1是否协同炎症相关细胞因子参与调节活动性肺结核患者外周血中单核细胞的免疫功能。 [方法] 1.按照2000年中华医学会结核病学分会制定的肺结核诊断标准收集36例痰涂结核菌阳性活动性肺结核患者及32例健康志愿者的外周血及痰液,采用全自动血液分析仪检测并分析外周血白细胞的数量,采用ELISA方法检测痰液及血浆中HMGB1、IL-6、IL-10和TNF-α含量。 2.采用佛波酯(PMA)诱导THP-1分化为巨噬样细胞后,分别采用BCG、LPS刺激,并于刺激后6h、12h及24h收集细胞培养上清液,采用ELISA法检测HMGB1、IL-6、IL-10和TNF-α含量,同时设PBS对照组。加入抗HMGB1阻断抗体后,采用实时定量PCR检测THP-1细胞HMGB1 mRNA和IL-6 mRNA的表达,进一步探讨BCG刺激THP-1细胞后HMGB1及IL-6表达水平的关系。 [结果] 1.肺结核患者外周血白细胞检测结果 全自动血液分析仪检测结果显示肺结核患者外周血白细胞总数、单核细胞、淋巴细胞和中性粒细胞绝对值均显著高于健康志愿者,且单核细胞和淋巴细胞百分数显著高于正常对照组,但中性粒细胞百分数与正常人无显著差异。 2.活动性肺结核患者血浆和痰液中HMGB1、IL-6、IL-10和TNF-α含量及相关性分析 活动性肺结核患者血浆和痰液中HMGB1、IL-6、IL-10和TNF-α含量较健康对照组均明显升高;活动性肺结核患者血浆HMGB1、IL-6、IL-10含量分别与其痰液中的含量呈正相关,血浆TNF-α含量与在其痰液中的含量无明显相关;健康对照组痰液HMGB1、IL-6、IL-10以及TNF-α含量分别与其血浆中的含量均无相关性;对活动性肺结核患者血浆和痰液中HMGB1、IL-6、IL-10和TNF-α含量进行相关性分析发现,无论是血浆还是痰液中,HMGB1与IL-6、IL-6与TNF-α含量之间均有显著相关性,其余各炎症因子之间无明显相关性;活动性肺结核患者血浆中HMGB1、IL-6含量与外周血单核细胞绝对数之间均呈正相关。 3.BCG刺激PMA诱导的THP-1细胞产生HMGB1及炎症相关因子的检测与分析 BCG刺激组HMGB1、IL-6含量明显低于LPS刺激组,但明显高于空白对照组;BCG或LPS刺激PMA诱导的THP-1细胞后,HMGB1、IL-6分泌均具有时间依赖性,其分泌量均在刺激的24 h达到最高点;BCG刺激组IL-10含量明显低于LPS刺激组,但明显高于空白对照组;BCG或LPS刺激PMA诱导的THP-1细胞12h时,IL-10的分泌量达到最高,之后逐渐下降;BCG刺激组上清液中TNF-α含量与LPS刺激组比较无明显统计学差异,但两组均高于空白对照组,BCG或LPS刺激细胞TNF-α的分泌也具有时间依赖性,其分泌量均在刺激的24 h达到最高点。 4.抗HMGB1阻断抗体对BCG刺激PMA诱导的THP-1细胞产HMGB1及IL-6表达的影响 抗HMGB1阻断抗体组或未加抗体组与空白对照组比较,细胞HMGB1mRNA和IL-6 mRNA表达水平均明显上升;抗HMGB1阻断抗体组与未加抗体组相比较,前者细胞IL-6 mRNA表达水平明显下降,但两组细胞HMGB1 mRNA的表达水平无明显差异。 [结论] HMGB1在活动性肺结核患者外周血及痰液中存在高表达,并与外周血单核细胞动态变化有关,提示可作为活动性肺结核的诊断、预后的生物学标志。