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目的:人巨细胞病毒(Human cytomegalovirus,HCMV)属β疱疹病毒亚科,为线性双链DNA病毒。HCMV感染早期主要表达两种蛋白,即IE72(ie1基因编码)和IE86(ie2基因编码),其中IE86在恶性胶质瘤的发生发展中具有重要作用。恶性胶质瘤是最常见的颅内肿瘤,恶性程度高,预后较差。Cobbs等人首先报道了HCMV感染与人类恶性胶质瘤的关系。但是,IE86是否在诱导恶性胶质瘤的转移这一过程中发挥关键的作用仍然是未知的。异质核核糖核蛋白(HnRNPS)是一种RNA结合蛋白,hnRNP A2B1是其家族中的一员。RON是一种原癌基因,其可变剪接体参与肿瘤发生发展多个过程,例如细胞迁移、凋亡和上皮-间质转化等。△Ron(又称RONΔ165)通过跳过外显子11生成。△Ron的过度表达增加了细胞运动性和侵袭性。目前为止,hnRNP A2B1在恶性胶质瘤发展中的作用仍然了解不多。本研究,探究ie2对于神经胶质瘤hnRNP A2B1的表达水平、RON基因的可变剪接及恶性胶质瘤细胞迁移机制的影响,同时为恶性胶质瘤治疗提供新的思路。方法:通过免疫共沉淀(Co-IP)检测U87MG(恶性胶质母细胞瘤细胞)中与HCMV IE86相互作用的蛋白质。利用液相色谱质谱(LC-MS/MS)技术结合数据库搜索找到相互作用的蛋白质。实时定量PCR——Quantificational Real-time Polymerase Chain Reaction(qRT-PCR)、Western Blot检测ie2转基因鼠和C57鼠(阴性对照)脑组织以及转染pEGFP-N3-ie2质粒的U87MG和U87MG中剪接相关蛋白hnRNP A2B1表达水平。实时定量PCR、Western Blot检测pPR244-shRNA敲低hnRNP A2B1后其表达水平。细胞划痕实验、Transwell迁移实验检测转染pEGFP-N3-ie2质粒及敲低hnRNP A2B1后U87MG迁移活性的变化。RT-PCR检测转染pEGFP-N3-ie2质粒、敲低hnRNP A2B1后基因RON剪接变化。结果:U87MG细胞中,检测到7种蛋白质与IE86相结合,包括hnRNP A2B1、hNRNP A1、hnRNP C、hnRNP M、SYNCRIP、hnRNPK和hnRNPH1,其中,hnRNP A2B1蛋白质丰度值最高。qRT-PCR与Western Blot结果显示:与C57野生鼠相比,ie2转基因鼠脑组织中hnRNP A2B1表达水平上升(P<0.01),转入pEGFP-N3-ie2质粒的U87MG中hnRNP A2B1表达水平高于U87MG(P<0.01);与U87-NC组相比,在pPR244-shRNA敲低的三个组别中hnRNP A2B1被成功下调,hnRNP A2B1的m RNA和蛋白质表达水平均下降(P<0.01)。细胞划痕实验结果显示:与U87-NC组相比,pEGFP-N3-ie2-U87组迁移能力增加(P<0.05),sh1-A2B1-U87组细胞迁移能力减弱(P<0.05)。Transwell迁移实验结果显示:pEGFP-N3-ie2-U87组迁移能力增加(P<0.01),sh1-A2B1-U87组细胞迁移能力减弱(P<0.01),shRNA可部分抵消pEGFP-N3-ie2的促进作用。RT-PCR结果表明:与U87-NC组相比,pEGFP-N3-ie2-U87组剪切增强,△RON/RON比例增加(P<0.05);sh1-A2B1-U87组△RON/RON比例减少(P<0.05)。结论:本研究中,U87MG细胞中IE86蛋白与hnRNP A2B1蛋白相互作用。HnRNP A2B1在HCMV·ie2转基因小鼠脑组织中高度表达。在转染pEGFP-N3-ie2质粒的U87MG细胞系中hnRNP A2B1表达水平升高。此外,U87MG细胞中的hnRNP A2B1敲低抑制了肿瘤的迁移,而hnRNP A2B1可能通过影响RON的剪接模式来介导这种作用。研究结果表明,HCMV·ie2通过调节hnRNP A2B1表达介导△RON可变剪接从而促进恶性胶质瘤的迁移。