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欧李(Cerasus humilis(Bge.) Sok.)为蔷薇科樱桃属果树,因其果实中含钙量高,商品名被称为“钙果”。欧李果肉可食,仁可入药,茎可做饲料和编制材料,尤其具有较强的抗旱性,表现为旱时能避旱,雨季能集水,开发利用前景非常广阔。但欧李生长过程中尤其是幼苗阶段易受胁迫的影响。叶黄素循环存在于高等植物和绿色藻类,被认为是保护光合机构免受过剩光能破坏的一种重要机制。紫黄质脱环氧化酶(VDE)是叶黄素循环的关键酶,目前对于VDE的研究主要集中在模式植物中,对林木材料中VDE研究还鲜见报道,而且在不同材料中可能存在功能的特异性,为此,我们构建了欧李ChVDE表达载体并进行拟南芥的转化,并进一步探究该基因的作用,主要结果如下: 1、欧李ChVDE基因(KM504154)全长1803bp,包括1446bp的开放读码框,共编码481个氨基酸多肽,分子量约为54.4kD,理论等电点为5.75。氨基酸序列与进化树的比对表明其与白梨、苹果、碧桃、和梅花等物种间具有很高的同源性。进化树分析表明ChVDE与茶树和橙子具有很高的相似性。 2、我们利用gateway技术构建35S: ChVDE- GFP载体,利用浸花法对野生型(WT)和突变体(npq1-2)拟南芥分别进行遗传转化,获得野生型过表达ChVDE(OE)株系3株与VDE缺失突变体过表达ChVDE株系4株。亚细胞定位分析表明ChVDE定位于叶绿体中,气孔保卫细胞边缘也有发现,推测VDE参与光合作用中的气孔开闭。对于根长和脯氨酸的测定实验来说,过表达拟南芥幼苗具有强于野生型和突变体的特点。 3、干旱和盐胁迫下,对拟南芥野生型(WT)、VDE缺失突变体(npq1-2)、转ChVDE缺失突变回复体(CE-3)和VDE过表达(OE-1)四种株系的研究表明,胁迫下过表达株系脱环氧化状态即(A+Z)/(V+A+Z)明显高于其他株系,净光合速率、总呼吸速率的测定同样表现出相对更强的抗旱能力,而对于突变体来说则表现出更易受非生物胁迫的特征。 结果表明了欧李ChVDE基因在干旱和盐胁迫作用下起到非常重要的作用,本研究结果为木本植物抗逆遗传改良研究提供了一定的指导。