第一部分、Survivin mRNA表达水平在恶性胸腹腔积液诊断中的应用　　 目的:恶性胸腹腔积液的标准诊断方法仍然是基于细胞病理学的检查,通常情况下该方法诊断的敏感性只有50％-70％。Survivin属于凋亡抑制蛋白家族成员,在多种恶性实体瘤中高表达,而在正常组织中低表达。这种高度组织分布特异性决定了其在肿瘤早期诊断中的重要价值。恶性体腔积液的游离RNA中蕴含丰富的分子生物学信息,本研究旨在探讨Survivin mRNA在良恶性胸腹腔积液中的表达差异及其诊断价值。　　 方法:收集诊断明确的112例良恶性胸腹腔积液,提取标本游离RNA,用荧光定量RT-PCR方法检测Survivin mRNA的相对表达水平。同时检测标本中肿瘤标记物CEA的表达水平并比较两者单独及联合使用时的诊断价值。　　 结果:Survivin mRNA在恶性胸腹腔积液中的表达显著高于良性胸腹腔积液(P<0.001);Survivin mRNA在非小细胞肺癌Ⅳ期患者恶性胸腔积液中显著高于Ⅲ期患者的恶性胸腔积液(P=0.04);Survivin mRNA诊断恶性胸腹腔积液的敏感性为79.01％,特异性为87.10％,准确性为81.25％;Survivin mRNA联合CEA诊断恶性胸腹腔积液的敏感性为86.42％,特异性为93.55％,准确性为88.40％,显著高于单一指标。　　 结论:Survivin mRNA在恶性胸腹腔积液中的表达与其恶性程度密切相关。以游离RNA为基础的分子生物学检测与肿瘤标志物CEA联合检测在恶性体腔积液的诊断中有着广泛的应用前景。　　 第二部分、药物疗效相关分子在恶性腹腔积液的表达及意义　　 目的:以药物遗传学为平台检测药物疗效相关基因的表达及变异情况在恶性肿瘤化疗药物选择上有着极大的指导潜力。氟尿嘧啶和多西紫杉醇是胃肠道肿瘤患者常用的化疗药物。氟尿嘧啶代谢相关酶TS、TP、DPD和OPRT已在多种实体瘤中被证明可以预测氟尿嘧啶疗效;有报道BRCA1、Tau、Survivin和β-tubulinⅢmRNA与多西紫杉醇疗效相关。本研究以恶性腹腔积液中原代肿瘤细胞为研究对象,探讨上述药物疗效相关分子在恶性腹腔积液化疗药物疗效预测中的作用。　　 方法:收集43例经病理确诊的恶性腹腔积液,分离原代肿瘤细胞,CCK8体外药物敏感性试验检测化疗药物氟尿嘧啶、多西紫杉醇对原代肿瘤细胞的抗肿瘤作用。提取原代肿瘤细胞的总RNA,荧光定量RT-PCR检测细胞中药物疗效相关基因TS、DPD、TP、OPRT、BRCA1、Tau、Survivin和β-tubulinⅢ mRNA的相对表达水平。　　 结果:DPD mRNA的表达在胰腺癌来源的原代肿瘤细胞中高于胃癌(P=0.01)、大肠癌(P=0.01)和肝癌(P=0.006)来源的原代肿瘤细胞。TS mRNA在恶性腹腔积液原代肿瘤细胞中的表达水平与5-FU药物敏感性呈负相关,低表达者对5-FU敏感性高(R=-0.42,P=0.01);OPRT mRNA在恶性腹腔积液原代肿瘤细胞中的表达水平与5-FU药物敏感性呈正相关,高表达者对5-FU敏感性高(R=0.65,P=0.001)。DPD与TP mRNA在恶性腹腔积液原代肿瘤细胞中的表达水平与5-FU药敏结果无相关性(P>0.05)。Tau mRNA在恶性腹腔积液原代肿瘤细胞中的表达水平与Doc药物敏感性呈负相关,低表达者对Doc敏感性高(R=-0.50,P=0.001);BRCA1 mRNA在恶性腹腔积液原代肿瘤细胞中的表达水平与Doc药物敏感性呈正相关,高表达者对Doc敏感性高(R=0.37,P=0.01);Survivin与βtubulinⅢ mRNA在恶性腹腔积液原代肿瘤细胞中表达水平与Doc药敏结果无相关性(P>0.05)。　　 结论:在转移性恶性腹腔积液中,TS及OPRT mRNA的表达与氟尿嘧啶的敏感性相关,Tau及BRCA1 mRNA的表达与多西紫杉醇的敏感性相关。对于有恶性腹腔积液的患者,可通过简单无创的腹腔穿刺获得与药物敏感性相关的分子表达谱的信息,为恶性腹腔积液的个体化治疗提供理论基础。　　 第三部分、中药单体汉防己甲素对恶性胸腹腔积液中原代肿瘤细胞的抗肿瘤作用　　 目的:恶性胸腹腔积液是恶性肿瘤最常见的并发症之一,其出现常提示恶性肿瘤的晚期进展,治疗效果欠佳。全身治疗为主的一般疗法效果欠佳,常需反复抽放胸腹腔积液以缓解症状,严重影响患者的生存质量。中医药治疗恶性胸腹腔积液已表现出一定的效果,本研究旨在探讨中药单体汉防己甲素对恶性胸腹腔积液中原代肿瘤细胞的抗肿瘤作用。　　 方法:体外培养肿瘤细胞系BGC-823、A549、LOVO和SMMC-7721,CCK8法检测汉防己甲素在细胞系中的抗肿瘤作用。收集34例经病理确诊的恶性胸腹腔积液并分离原代肿瘤细胞,用CCK8法检测原代肿瘤细胞中汉防己甲素及化疗药的药物敏感性。提取原代肿瘤细胞RNA并用荧光定量RT-PCR法检测汉防己甲素对凋亡相关蛋白基因Survivin mRNA及Bcl-2 mRNA表达的作用。　　 结果:汉防己甲素对四株细胞系的IC50平均值为24.32μM,对34例恶性胸腹水中原代肿瘤细胞IC50平均值为38.23μM,两者无显著差异(P>0.05)。汉防己甲素对胃癌来源的腹腔积液中原代肿瘤细胞的抗肿瘤作用显著优于肺癌来源的胸腔积液中的原代细胞(P=0.04)。4例对汉防己甲素耐药的原代肿瘤细胞对多西紫杉醇、氟尿嘧啶、顺铂存在交叉耐药,而对化疗药物耐药的原代肿瘤细胞对汉防己甲素无交叉耐药。汉防己甲素的药物敏感性与原代细胞中凋亡相关蛋白bcl-2mRNA表达显著相关(R=-0.36,P=-0.04)。　　 结论:汉防己甲素对恶性腹腔积液原代肿瘤细胞,尤其对化疗药物耐药的肿瘤细胞有一定的抗肿瘤作用。