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目的:通过对体外培养的成骨细胞刺激不同强度的直流电刺激,探讨微量直流电对成骨细胞增殖和功能的影响,为口腔修复临床应用直流电促进牙槽骨生长提供体外细胞学依据。方法:自行设计研制体外成骨细胞直流电刺激装置:将电源、滑动变阻器、开关、六孔培养板固定在一块300mm×200mm的有机玻璃板上,并把电路串联起来,在六孔培养板每孔所对应的板盖上打两个小孔,将镍钛弓丝一端与电路连接,另一端穿过培养板盖浸入培养液内,将电路接通,用万用表测定电流强度和稳定性。通过组织块法原代分离培养新生Sprague-Dawley大鼠颅顶骨的成骨细胞,传代培养至第三代进行碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)染色鉴定。纯化后扩增成骨细胞,传代培养至第四代或第五代备用。实验第一部分,将细胞按1.0x105个/孔的浓度接种于六孔培养板中,每板接种四孔。实验分为三组,微电流对三组细胞刺激的强度分别为0μA、20μA和100μA,每天刺激三次,于微电流刺激的第1天,第3天,第5天,第7天时分别收集三组细胞,用MTT法测定三组成骨细胞的数量,之后重复实验两次,用Spss16.0软件将所得数据进行统计学分析并绘制细胞增殖曲线;实验第二部分,细胞分组及接种的方法同第一部分,之后于微直流电刺激的第1天,第3天,第5天,第7天时收集三个实验组的成骨细胞测定其ALP活性,重复该实验两次,将实验所得数据用Spss16.0软件进行统计学分析并绘制成骨细胞ALP活性直方图。结果:本实验自行研制的成骨细胞直流电刺激装置通电过程中电流稳定,绝对误差在3μA内;经强度为20μA和100μA的直流电刺激后的细胞其增殖和对照组无统计学差异,三组细胞均在第3～5天时增殖速度最快,第5～7天时增殖速度减慢;经强度为20μA和100μA的直流电刺激后的成骨细胞和对照组成骨细胞的ALP活性均有统计学差异;强度为20μA的直流电刺激组与强度为100μA的直流电刺激组比较,成骨细胞ALP活性也有统计学差异(P<0.01),且直流电强度为20μA的刺激组成骨细胞ALP活性增加较明显。结论:直流电强度为20μA和100μA时对细胞的增殖无促进作用,但可以增加成骨细胞的ALP活性,且经20μA的直流电刺激的成骨细胞ALP活性明显优于经100μA直流电刺激的成骨细胞,证明微量直流电可以促进成骨细胞的活性,特别是直流电强度为20μA时对成骨细胞活性的促进作用更为显著,这为微量直流电用于口腔修复临床促进牙槽骨的增长提供了体外细胞学依据。