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研究背景舌鳞癌是口腔鳞癌中发生率最高的恶性肿瘤,常在肿瘤早期即发生区域性颈淋巴转移,严重影响患者的治疗和预后。据统计,无颈淋巴转移舌鳞癌患者的5年生存率大于50%,而有颈淋巴转移舌鳞癌患者的5年生存率则小于30%。目前临床上对于舌鳞癌颈淋巴转移的机制尚不清晰,对其早期诊断及干预治疗仍缺乏有效的手段。因此,深入了解舌鳞癌颈淋巴转移的机制,寻找有效的早期诊断、干预舌鳞癌颈淋巴转移的新途径,对于改善预后、提高患者的生存质量具有重要意义。长链非编码RNA（lncRNA）是一类长度大于200核苷酸,不具备蛋白编码功能的RNA。越来越多的研究显示lncRNA能够在染色质修饰、转录或转录后等水平调控下游基因的表达,进而参与细胞增殖、侵袭及凋亡等多种生物学过程并与肿瘤等疾病的发生发展相关。LncRNA是近几年来发现的能够参与多种病理生理过程并发挥重要作用的RNA,其在头颈肿瘤中的研究刚刚起步,在舌鳞癌中的研究鲜有报道,其在舌鳞癌中的作用机制尚不清晰。并且尚未有学者研究与舌鳞癌颈淋巴转移相关的lncRNA。本实验应用基因芯片筛选并进一步研究与舌鳞癌颈淋巴转移相关的lncRNA,为舌鳞癌的诊断和治疗提供新的方向。本研究分为以下三部分:第一部分舌鳞癌颈淋巴转移相关IncRNAs的筛选目的通过lncRNA表达谱芯片,探索可能与舌鳞癌颈淋巴转移相关的lncRNA及其调控方式,为后续研究提供方向。方法1.基因芯片检测舌鳞癌组织中lncRNA表达谱的差异;2.采用生物信息学分析探索lncRNA在舌鳞癌颈淋巴转移中的调控机制。结果1.通过lncRNA芯片检测出在无颈淋巴转移舌鳞癌组织和颈淋巴转移舌鳞癌组织中表达量有显著差异的lncRNA2210个,其中表达上调者1188种,表达下调者1022种。筛选出了可能和舌鳞癌颈淋巴转移相关的两个lncRNA:NR002819（MALAT1）（表达下调）和 NR002323（TUG1）（表达上调）;2.构建可能影响舌鳞癌颈淋巴转移的关键分子及其调控方式图。结论多种lncRNA在无颈淋巴转移舌鳞癌组织和颈淋巴转移舌鳞癌组织的lncRNA表达谱中存在明显差异,它们可能通过调控相关因子直接或间接参与调控舌鳞癌颈淋巴转移,尤其是肺腺癌转移相关转录本1（MALAT1）及牛磺酸上调基因1（TUG1）与舌鳞癌的关系值得进一步研究。第二部分舌鳞癌组织中差异IncRNAs表达水平的验证目的进一步验证MALAT1、TUGl在舌鳞癌转移组和非转移组中的表达情况,选择具有显著差异的lncRNA进行后期研究。方法利用Q-PCR实验对舌鳞癌组织和癌旁正常组织中MALAT1及TUG1的表达水平进行验证并分析。结果1.在转移组中,对比癌旁正常组织,癌组织中MALAT1的表达量显著下调（P<0.001）;2.在无转移组中,对比癌旁正常组织,癌组织中MALAT1的表达量显著上调（P<0.001）;3.转移组与无转移组相比,对比无转移组癌组织,转移组癌组织中MALAT1的表达量显著下调（P<0.001）,与芯片结果一致;对比无转移组癌旁正常组织,转移组癌旁正常组织中MALAT1的表达量显著上调（P<0.001）;4.对比无转移组癌组织,TUG1在转移组癌组织中稍有下调,但无显著性差异（P>0.05）。结论从Q-PCR结果分析得出,无论在转移组还是无转移组,MALAT1在癌旁正常组织和癌组织中表达量都具有显著性差异,这说明MALAT1在舌鳞癌的发生中具有一定作用。未发生颈淋巴转移舌鳞癌的癌组织中MALAT1的表达量明显高于癌旁正常组织,而发生颈淋巴转移舌鳞癌的癌组织中MALAT1的表达量明显低于癌旁正常组织,这说明MALAT1的表达量在舌鳞癌发生颈淋巴转移前后有了显著变化。对比转移组和无转移组癌组织,转移组中MALAT1的表达量明显低于无转移组,提示MALAT1的表达水平可能与舌鳞癌颈淋巴转移相关,MALAT1在舌鳞癌颈淋巴转移中的作用及机制值得进一步研究。第三部分MALAT1对舌鳞癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响目的检测MALAT1在舌鳞癌细胞系中的表达情况,利用体外实验研究MALAT1对舌鳞癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响。方法1.Q-PCR检测舌鳞癌细胞系中MALAT1的表达情况;细胞划痕实验检测舌鳞癌细胞系的迁移能力;2.构建MALAT1的有效干扰慢病毒及阴性对照;3.CCK8细胞增殖实验检测MALAT1表达下调对舌鳞癌细胞体外增殖能力的影响;4.细胞划痕和transwell小室实验检测MALATI表达下调对舌鳞癌细胞体外迁移和侵袭能力的影响。结果1.MALAT1在舌鳞癌细胞系CAL-27、SCC15、Tca8113中表达水平较高（ACt值≤12）。划痕实验结果示:CAL-27细胞迁移率为57%;SCC15细胞迁移率为63%,均可进行细胞迁移实验。Tca-8113细胞迁移率为24%,不适宜进行迁移实验;2.成功构建MALAT1的有效干扰慢病毒LV-MALAT1-RNAi（25688-1）及阴性对照慢病毒CON077;3.CCK8实验显示,MALAT1表达下调可抑制舌鳞癌细胞的体外增殖能力:在CAL-27、Tca8113细胞中,细胞增殖倍数显著降低（P<0.01）,在SCC15细胞中稍有降低,但无显著性差异（P>0.05）;4.细胞划痕和transwell小室实验显示,MALAT1表达下调可显著抑制舌鳞癌细胞CAL-27、SCC15的体外迁移能力（P<0.05）;MALAT1表达下调可显著抑制舌鳞癌细胞CAL-27、SCC15的侵袭能力（P<0.01）。结论1.MALAT1在舌鳞癌细胞系中的表达水平与舌鳞癌细胞系的迁移能力成正比。2.MALAT1可在转染MALAT1-shRNA的舌鳞癌细胞系中呈现低表达。3.MALAT1表达下调可抑制舌鳞癌细胞的体外增殖、迁移及侵袭能力,提示MALAT1在舌鳞癌颈淋巴转移中可能发挥重要作用,有望成为舌鳞癌颈淋巴转移的诊断和治疗靶点,其在舌鳞癌颈淋巴转移中的调节机制有待我们进一步探索。