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目的:对肝灵片进行急性毒性和3个月重复给药毒性试验，确定肝灵片的安全剂量范围，探讨存在的相关毒性机制，为肝灵片进一步的毒理学研究提供依据。 方法:1、肝灵片对小鼠的急性毒性试验60只KM小鼠，雌雄各30只，按体重分层法随机分为肝灵片45.00，29.25，19.02，12.36，8.04 g/kg剂量组及阴性对照组，每组雌雄各5只，禁食（不禁水）12h。ig给药，每日3次（上午8:30、下午14:30、晚上20:30分左右），共给药1天。单次给药剂量分别为15.00，9.75，6.34，4.12，2.68 g/kg，各组给药容量均为30 ml/kg。给药当日，在给药后即刻以及给药后5、15、30、60、120、240、360 min各观察1次动物的毒性反应，濒死动物剖检，连续观察14天并称取给药后第1，3，5，7，9，11，13，14 d雌雄小鼠的体重，观察指标参考文献[1]，称取小鼠的体重，记录小鼠在给药后异常反应、死亡时间，计算死亡率，尽可能仔细观察小鼠在给药后从异常反应出现到恢复接近正常的时间。观察期结束后，采用脱颈椎法处死存活动物并进行尸检。 2、肝灵片对大鼠3个月重复给药毒性试验选用SD大鼠120只，雌雄各60只，设肝灵片低、中、高(生药0.5、2.5、5.0 g/kg)3个剂量组，分别相当于大鼠药效剂量的1.43、7.14和14.28倍（人用剂量的10、50和100倍），另设1个阴性对照组。每周连续给药6天灌胃给药，给药13周，停药后恢复1个月。给药体积2 ml/100 g体重，观察指标[2]主要有:动物一般状况观察、血液学指标、血液生化学指标、心电图检查、系统尸解和组织病理学检查等。 结果:1、肝灵片对小鼠的急性毒性试验 1.1就体重方面，雄性和雌性阴性对照组小鼠均持续增加。 1.2肝灵片45.00 g/kg剂量组:雄性小鼠:1例死亡，濒死动物剖检仅在胃内见微黄色糊状物，余脏器未见明显异常;给药后第3，7，9d体重显著低于阴性对照组(P＜0.05，P＜0.01)，给药后第11，13 d小鼠的体重增长较快，与阴性对照组比差异无显著性(P＞0.05)。雌性小鼠:1例死亡;给药后第7d体重略有增加，与阴性对照组比，有显著性差异(P＜0.05)，在给药后第9、11、13、14d与阴性对照组比均无显著性差异(P＞0.05); 1.329.25g/kg剂量组雄性小鼠和雌性小鼠均无动物死亡;雄性小鼠药后第3，7，9d小鼠体重显著低于阴性对照组(P＜0.05，P＜0.01);雌性小鼠给药后自第1d至实验结束，体重与阴性对照组比均无显著性差异(P＞0.05); 1.412.36 g/kg剂量组雄性小鼠的体重仅在给药后第3d显著低于阴性对照组(P＜0.05); 1.519.02、8.04 g/kg剂量组动物1天内分3次给药后所有小鼠均未见明显异常，实验过程中小鼠体重均衡增长与阴性对照组比均无显著性差异(P＞0.05) 实验结束统计45.00 g/kg剂量下雄性和雌性小鼠的急性致死率均为20％。 2、肝灵片对大鼠3个月重复给药毒性试验 试验期间未见动物死亡，未观察到明显的临床毒副反应，对实验用大鼠的体重、摄食量、饮水量、血液学指标、血液生化学指标、尿液检查、系统尸解、脏器系数检查结果进行系统分析:肝灵片各组大鼠均未出现与药物相关变化。系统尸解及病理组织学检查结果表明:虽然少数动物的肝、肾、肺等出现血管充血、变性、增生/坏死等改变，但这些变化散发在各组动物中，未见明显的剂量-效应关系，且发生率低，考虑为自发性病变或与给药操作有关，不是药物的毒性反应。 结论:1、肝灵片对小鼠的急性毒性试验本次试验结果显示，肝灵片45.00g/kg剂量产生了严重急性毒性反应，引起雌雄小鼠分别20％的死亡;29.25 g/kg剂量组急性毒性反应轻微、出现时间晚、例数少，并很快恢复正常，无动物死亡。19.02、12.36、8.04 g/kg剂量组，小鼠未见明显异常。因此，小鼠对肝灵片的毒性反应呈现出一定的剂量-反应的关系。而且，肝灵片45.00 g/kg剂量下，雄性小鼠对肝灵片急性毒性反应显著强于雌性小鼠，说明雌雄小鼠对肝灵片产生的毒性反应有差异。 本次试验结果显示:小鼠对肝灵片的最大耐受量MTD＞生药29.25 g/kg，为临床剂量0.05 g/kg（以成人体重60 kg计）的585倍。上述急性毒性反应，可能涉及动物的呼吸中枢刺激、躯体运动。急性毒性的试验结果提示，在对肝灵片进行临床前药效学和其他毒性评价以及临床试验、质量控制时，应注意其对动物神经中枢可能产生的影响。 2、肝灵片对大鼠3个月重复给药毒性试验试验期间无动物死亡，且没有出现明显的临床毒副反应，根据体重、摄食量、饮水量、血液学指标、血液生化学指标、尿液检查、系统尸解、脏器系数检查结果分析，肝灵片各组动物均未出现与药物毒性相关变化。动物组织病理学检查结果显示，肝、肾、肺、肾上腺等出现血管充血、变性、增生、坏死等改变，但这些变化散发在各组动物中，未见明显的剂量效应关系，且发生率低，为自发性病变。根据上述结果判断，肝灵片的无毒性反应剂量(no observed adverse effect level，NOAEL)为生药5.0 g/kg，相当于临床剂量的100倍。