【摘 要】
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挥发性醛类物质是黄瓜果实的特征香气化合物,其中脂氢过氧化物裂解酶(HP L)是醛类挥发性物质合成下游的关键酶。为探索黄瓜CsHPLs基因参与黄瓜醛类合成进而解析其功能,本试验以
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挥发性醛类物质是黄瓜果实的特征香气化合物,其中脂氢过氧化物裂解酶(HP L)是醛类挥发性物质合成下游的关键酶。为探索黄瓜CsHPLs基因参与黄瓜醛类合成进而解析其功能,本试验以黄瓜自交系材料No.26(2,6-壬二烯醛和 E-2-壬烯醛的比值为2.78,黄瓜味、清香味浓)和水果型黄瓜14-1((E, Z)-2, 6-壬二烯醛/(E)-6-壬烯醛为1.414,黄瓜味和清香味较淡)为材料研究了 CsHPLs 的表达模式分析、果实不同发育时期香气成分分析、原核表达和对黄瓜的遗传转化等,为黄瓜醛类物质形成的分子机理奠定理论基础。本试验的主要结论如下: 1.黄瓜果实发育进程中醛类香气含量分析及CsHPLs表达模式 GC-MS分析表明,果实发育进程中C6醛和相应的醇类物质在果实发育始期(0~8 d)含量较高,花后8 d显著下降。与C6醛含量不同的是,在果实发育进程中C9醛和相应的在果实发育始期醇类物质(0~8 d)含量较低,花后8 d显著上升,花后10~14 d其含量几乎占醛类物质含量的95%以上。在果实发育进程中13-CsHPL和9/13-CsHPL基因的表达较低,而9-CsHPL基因表达较高,其变化趋势和C9醛含量变化趋势相同。 2.构建了 CsHPLs 原核表达载体并进行了重组蛋白的诱导 利用原核表达载体pET32a(+)构建CsHPLs基因的原核表达载体的,并转化至E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导表达13-CsHPL、9/13-CsHPL和9-CsHPL分别约在55kD、70kD和70kD处出现明显的特征蛋白条带,各个重组蛋白的分子量与预期结果相符。 3. CsHPLs基因的植物过量表达载体构建及遗传转化 构建了CsHPLs基因的植物过量表达载体,并将其转化到农杆菌(GV3101),利用农感染法侵染黄瓜子叶节外植体,共获得9株过量表达的再生植株,其中PCR阳性株4株。
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