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【背景与目的】肾细胞癌(renal cell carcinoma,RCC)是泌尿系常见肿瘤,其发病率呈上升趋势,2010年其发病率约占成人恶性肿瘤的3.8%,占肾脏肿瘤的90%-95%。随着影像学技术水平的提高,提高了部分早期肾癌患者的预后生存率,但仍有一部分晚期及发生转移的肾细胞癌患者治疗预后并不理想。肾癌细胞对放化疗均不敏感,这一难题已成为当今肾癌治疗的热点。表皮生长因子受体EGFR已被证实在肾癌中超表达,其表达可能与肾癌对放化疗不敏感有关系,针对EGFR的治疗有望改善肾癌对放化疗不敏感的现状,为晚期肾癌患者带来了希望。RNAi作用机制是由互补的内源或外源RNA形成的双链RNA诱发基因沉黙。RNAi具有高特异性、高效性、高稳定性、可遗传性等特点,其在肿瘤的基因的研究和治疗方面已表现出了强大的潜力。RNAi给肿瘤的治疗带来了广阔的前景,将RNAi技术联合放疗以增加对肿瘤细胞的杀伤力,且毒副作用小,为肿瘤的治疗开辟一条新途径。本实验课题,利用RNAi技术沉默ACHN肾癌细胞中的EGFR基因,抑制了ACHN肾癌细胞株的增殖、迁移、侵袭能力,并增加了其对放疗的敏感性,为临床肾癌的治疗提供了新的途径,并奠定了理论基础。【方法】免疫组化及细胞免疫荧光技术证明组织水平及细胞水平EGFR的表达,体外培养肾癌ACHN细胞,化学合成针对EGFR的小干扰RNA,通过脂质体转染法转染进ACHN肾癌细胞中,利用Western blot技术检测细胞中EGFR蛋白的敲除效率,通过台盼蓝拒染法测定细胞生长曲线,用MTT比色分析法检测细胞增殖抑制率,细胞划痕实验检测细胞迁移能力,transwell检测细胞侵袭能力。然后分别用0、2、4、6、8Gy剂量的X线对5组肾癌细胞(每组包含空白对照组、非异性RNA干扰组、特异性RNA干扰组)进行照射,光学显微镜下观察细胞凋亡情况,采用台盼蓝据染法检测细胞凋亡率。【结果】肾癌组织及ACHN肾癌细胞均可见EGFR呈高表达状态,特异性siRNA可显著抑制EGFR的表达;生长曲线提示,siRNA组细胞生长明显减慢,在24h、48h、72h、96h增殖抑制率分别为15.6%、38.4%、64.1%、68%,均高于空白组及阴性对照组(P<0.05)。siRNA组细胞的迁移及侵袭能力同样较空白组及阴性对照组明显降低。光学显微镜下观察到RNAi联合放疗组细胞死亡情况明显,台盼蓝拒染法检测特异性干扰EGFR基因组可显著提高ACHN肾癌细胞对放疗的敏感性(P<0.05)。【结论】体外研究表明,siRNA抑制EGFR表达后,肾癌细胞的增殖、迁移及侵袭能力显著降低。siRNA沉默ACHN肾癌细胞的EGFR表达可明显提高肾癌细胞对放疗的敏感性,为肾癌放射治疗提供了新思路。针对EGFR的RNAi技术有望成为肾癌基因治疗的新方法。