儿茶酚功能化壳聚糖/牡蛎肽温敏水凝胶的制备及其性能研究

来源 :广东海洋大学 | 被引量 : 2次 | 上传用户:abdusamat128
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创伤是现代社会最常见的一种疾病,具有很高的发病率和致残率,迄今为止,各种原因导致的出血、皮肤创伤依然严重威胁着人类的健康和生活质量。我国海洋生物资源丰富,开发海洋生物资源为新型生物医用材料是推动海洋经济快速发展重要途径,具有重大的科学意义、经济价值和社会效益。本论文以壳聚糖(CS)为原料合成儿茶酚功能化壳聚糖(CS-C),然后以β-甘油磷酸钠(β-GP)为温敏剂与海洋活性肽复合制备具有止血和创伤修复效果的温敏水凝胶。主要研究内容和结果如下:1.通过偶联反应,将3,4-二羟基苯丙酸(HCA)接枝到CS主链上,合成儿茶酚功能化壳聚糖(CS-C),采用紫外光谱、红外光谱和核磁共振谱等表征CS-C的化学结构,确定CS-C接枝成功,其接枝率为17.3%。对CS-C的水溶性、热稳定性、抗氧化能力进行研究,结果表明CS-C的水溶解度达5 g/100 m L以上,热稳定性良好,CS-C浓度在35μg/m L时DPPH自由基清除率达92.8%,浓度在1.5 mg/m L时,羟自由基清除率达到97.4%。细胞增殖活力、细胞凋亡和红细胞溶血实验结果表明CS-C无细胞毒性,溶血率低于国家标准,具有良好的生物相容性。2.通过构建CS-C/β-GP温敏水凝胶,并对该水凝胶进行表征。CS-C(2%)与β-GP(30%)以8:2体积比混合,在37℃下16 min内凝胶化。SEM观察冻干水凝胶呈现出多孔网状结构,有利于水及小分子药物自由通过,可用于止血、伤口愈合、药物释放等。3.对牡蛎肽(OP)进行分析,并通过乳化交联法制备壳聚糖/牡蛎肽微球(CSMO)。结果表明OP分子量在1000 Da以下的占95.48%,水溶性好,制备的CSMO球形完整,粒径主要集中在1-10μm,包封率72.8%,上载率11.9%,缓释效果好。4.通过构建CS-C/β-GP、CS-C/OP/β-GP和CS-C/CSMO/β-GP温敏水凝胶,测试其物理性能,并对细胞生物学的影响进行了研究。结果表明,CS-C/β-GP、CS-C/OP/β-GP和CS-C/CSMO/β-GP水凝胶具有孔径大小均匀的多孔结构,吸水率都在550%之上,能够保持伤口湿润的微环境;细胞实验结果表明三种水凝胶对L929细胞无明显细胞毒性,CS-C/CSMO/β-GP、CS-C/OP/β-GP在48 h内的细胞迁移率达到90%以上,与空白对照组对比有显著性差异,表明水凝胶具有促进L929细胞迁移的作用;在1000μg/m L的浓度下,水凝胶的溶血率都低于5%,材料安全。5.通过建立止血以及皮肤创伤修复模型,研究水凝胶对止血、创伤修复的作用。全血凝血指数、体外凝血时间、血小板粘附、红细胞吸附等结果表明水凝胶能够促进凝血;小鼠肝脏、断尾止血模型实验表明水凝胶能加速止血,与市售的明胶海绵止血效果相当;在皮肤创伤修复周期中,观察皮肤病理变化,检测组织中总蛋白、TNF-α和IL-6的含量,免疫组化分析Ki-67、VEGF表达,结果表明水凝胶可以减轻创面伤口处多种炎症细胞聚集,加速胶原纤维和新血管的生成,促进肉芽组织中总蛋白的合成,上调创面中Ki-67和VEGF的表达,促进创面愈合。
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