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背景和目的:
肝癌(Liver Cancer)是最常见的恶性肿瘤之一,其死亡率在消化系统恶性肿瘤中列第3位。我国每年约11万人死于肝癌。导致肝癌致死率高的一个主要原因是治疗后(手术或放疗或化疗后)肿瘤的再度复发和转移。为什么恶性肿瘤能耐受放疗和化疗的杀伤作用并再度复发和转移呢?新的研究发现,在肝癌组织中存在着一些耐药性的细胞称之为癌干细胞(Cancer Stem Cells,CSCs)或肿瘤干细胞(Tumor Stem Cells,TSCs)。这些细胞虽然在肿瘤组织中的数量非常少,只占肿瘤组织中细胞总数的1％,但他们能不断分化成为肿瘤细胞并能够不断增殖,维持自身数目的恒定。已经发现在肿瘤干细胞上存在着多个肿瘤干细胞标记物,其中CD133蛋白是广泛存在于肿瘤干细胞表面的标志物。许多研究已经证实,CD133蛋白阳性的肿瘤细胞与肿瘤的发生发展、浸润转移以及耐药性产生均有密切的关系。肿瘤干细胞不仅存在于肿瘤组织中,也发现存在于体外培养的肝癌细胞系中。尽管CD133蛋白的具体生物功能目前尚不清楚,但是它对于追踪肝癌干细胞的存在和研究其表达水平与肿瘤的发生发展、浸润转移以及耐药性的产生之间的关系均有重要价值。
己糖激酶是一个磷酸化6-碳糖的酶,特别是葡萄糖。在大多数组织和器官中,葡萄糖的磷酸化是葡萄糖代谢激活的第一步。碱性磷酸酶是一种负责从核酸、蛋白等各种底物分子上去除磷酸基团的酶,这一过程被称为去磷酸化。在肿瘤组织中,己糖激酶和碱性磷酸酶的活性均会升高。
Mung、Gin和L08是本实验室从绿豆、生姜和灵芝(Ganoderma)中提取分离的黄酮和三萜类化合物。本实验使用从绿豆、生姜和灵芝中提取分离的黄酮和三萜类化合物对人肝癌细胞SMMC7721的增殖及其肝癌干细胞中CD133表达水平的抑制作用进行了初步研究,以期为肝癌复发的预防提供实验依据。
材料与方法:
1.培养人肝癌细胞SMMC7721至对数生长期。
2.用生理盐水配制Mung、Gin和L08为100μ g／ml、200μ g／ml、300μg／ml、400μ g／ml和500μ g／ml浓度并分别处理对数生长期的SMMC7721细胞24小时、48小时和72小时,再用MTT法测细胞活性并绘制细胞生长曲线
3.用Mung、Gin和L08处理人肝癌细胞SMMC7721并用己糖激酶和碱性磷酸酶试剂盒测定肝癌SMMC7721细胞中己糖激酶、碱性磷酸酶的活性。
4.用Mung、Gin和L08处理人肝癌细胞SMMC7721并用Western Blotting法测定人肝癌肿瘤干细胞中CD133蛋白的表达水平。
结果:
1.Mung、Gin和L08在实验浓度上处理人肝癌细胞SMMC772后对其增殖均有抑制作用,且浓度与抑制作用密切相关。
2.Mung、Gin和L08在实验浓度上处理人肝癌细胞SMMC772后对己糖激酶和碱性磷酸酶的活性均有抑制作用。
3.Mung和L08在实验浓度上处理人肝癌细胞SMMC772后CD133蛋白表达水平均明显降低,且剂量与表达水平密切相关。但Gin则不能降低人肝癌的肿瘤干细胞中CD133表达水平。
结论:
1.Mung、Gin和L08均有抑制人肝癌SMMC7721增殖的作用,并且这种抑制作用与浓度密切相关。
2.Mung、Gin和L08均能抑制人肝癌细胞SMMC7721中己糖激酶和碱性磷酸酶的活性。
3.Mung和L08能够抑制人肝癌的肿瘤干细胞中CD133蛋白的表达。但Gin不能降低肿瘤干细胞中CD133蛋白的表达水平。