目的:食管癌是严重威胁人类健康及生命的恶性肿瘤之一。我国是食管癌高发区,食管癌的发病率居世界第一位。目前食管癌的早期诊断水平仍欠理想,大部分患者发现时已到中晚期。当今治疗食管癌的方法主要是外科手术结合放、化疗的综合治疗,但食管癌治疗效果仍不理想,5年生存率低于30%。如何早期发现食管癌,及尽早控制食管癌癌前病变的发展,提高生存率,延长食管癌患者生存时间,一直是医疗工作者关注的课题之一。再生因子Iα(Regeneration gene Iα, Reg Iα)属于一种钙依赖性植物血凝素家族( c型植物血凝素家族),它是一组分泌蛋白,其功能相当于急性反应蛋白,抗凋亡因子或胰腺β细胞和神经细胞分泌的生长因子,多种功能与肿瘤的发生、发展、转移关系密切。本实验应用定量聚合酶链反应、免疫组织化学和ELSIA的方法探讨RegIα在正常食管黏膜和食管鳞癌组织中的表达差异,与临床病理学特征的关系及手术前后患者体内Reg Iα的表达水平的变化。意义在于研究RegIα在食管癌病人中的表达情况,探讨其表达的临床意义。方法:⑴食管癌组织标本共30例,来自河北省人民医院胸外科、河北医科大学第四医院胸外科,2008年10月-12月的食管癌手术标本(病理证实均为鳞状细胞癌),病理诊断为正常的食管黏膜20例作为正常组织对照,取自食管癌组织手术远端5cm。应用半定量聚合酶链反应(Reverse transcriptase polymerase chain reaction ,RT-PCR)、免疫组织化学和ELSIA的方法检测Reg Iα的表达。应用RT-PCR的方法检测RegIαmRNA的表达,首先提取食管癌和食管正常黏膜组织的总RNA,普通琼脂糖凝胶电泳测定RNA的完整性。按RT-PCR试剂盒说明制备cDNA,配置20μlPCR反应体系,加入自100ng cDNA样本及合成引物进行扩增,应用凝胶成像仪上扫描记录各特异性DNA扩增片段灰度,比较目的基因与内参基因GAPDH的扩增片段灰度,用其比值作为mRNA表达水平的相对参数。应用免疫组织化学的方法检测RegIα蛋白在食管癌组织中的表达;根据0 ----3+的评分标准:0---不显色或少于10%的肿瘤细胞浆呈现任何水平的阳性染色;1+----超过10%的肿瘤细胞浆呈现微弱染色,或在部分细胞浆上染色;2+----超过10%的肿瘤细胞浆全部弱染色;3+----超过10%的肿瘤细胞浆全部呈现强染色。⑵患者血液标本来源:30例食管癌手术病人术前1天和术后7天采新鲜血,经离心获得血清;20个健康员献血员血清作为正常对照。应用ELSIA方法分析食管癌患者血液中RegIα的表达,结果判断:每个标准品和标本的OD值应减去零孔的OD值,按标准品浓度及吸光度做出标准曲线,根据各待测样品吸光度在标准曲线上的位置读出相应浓度。统计学方法:应用SPSS 13.0统计学软件对所有数据进行t检验、χ2检验或秩和检验分析,计算P值,以P值<0.05判断差异有统计学意义。结果:1 RegIα蛋白在正常食管黏膜及食管癌组织中的表达情况:在20例正常食管黏膜组织中,RegIα表达均为阴性,但在30例食管癌组织中表达阳性率为60%(18/30)。统计学处理显示,两组表达的阳性率差异明显(P<0.05)。2 RegIαmRNA在正常食管黏膜与食管癌组织中表达情况:食管癌中的Reg IαmRNA的表达强度明显高于正常食管黏膜。两组间Reg IαmRNA的表达水平存在明显的差异,RegIαmRNA表达的相对灰度值分别为:1.132±0.247(食管癌组织),0.719±0.176(正常食管粘膜);统计学处理显示:差异性显著(P<0.001)。3 RegIα的表达水平与食管癌病理学特征的关系:根据患者术后的病理学特征进行分组,患者RegIα水平与肿瘤的大小、侵润深度无明显相关(P>0.05);但与分化程度与肿瘤是否转移明显相关(P<0.001)。4 RegIα在食管癌患者血清中的表达水平明显高于正常对照组,P=0.011;且其表达水平在食管癌切除后明显下降,P=0.03。结论:1 RegIα蛋白在正常食管黏膜无表达,在食管癌中高表达。2 RegIα与食管癌的分化、转移明显相关,其表达可能介入食管癌细胞的分化及转移机制之中。未发现RegIα与食管癌其它病理特征相关。3食管癌病人RegIαmRNA的表达水平显著高于食管正常黏膜,故可作为食管癌早期检测的标志物。4 RegIα在患者食管癌切除前后表达水平明显变化,所以它的表达与食管癌发生有关。