采摘沙田柚（Citrus grandis Var. Shatinyu Hort）以及野生酸柚（Citrus grandis L.）盛花期的雄花，将两者的花粉放入冷的pH6.7、1%Nacl缓冲液{10%蔗糖、0.45mM Ca2+(Cacl2 ·6H2O)、1.63 mM B(H3BO3)}，在 5min，10min，20min，30min，40min，50min，60min，3h等不同时间内抽滤、提取其壁蛋白后直接透析除盐，然后在紫外分光光度计280nm下测定OD值。由于免去了研磨、缓冲液静置提取、冷冻离心等步骤，因此大大缩短了材料的处理时间。不同时间取样测定结果表明：（1）两者花粉壁释放的蛋白质在40min内随提取时间的增加而增加，40min后不再继续释放，并保持一定的释放量：沙田柚自40min后，花粉壁蛋白的释放量一直保持在0.364 mg/ml的水平上；而酸柚自40min后，壁蛋白的释放量一直保持在0.488 mg/ml的水平上。（2）5min提取的滤液中蛋白含量已达全部释放蛋白质的一半以上，这同Lewis在月见草中的结果是一致的。（3）进一步的分析发现，酸柚花粉壁蛋白质的释放，无论在速度上，还是在量上，都比沙田柚的大。以酸柚花粉壁不同时间提取物为对照组，采用非变性的聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）、变性的聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）、等电聚焦（IEF-PAGE）、双向电泳（IEF/SDS-PAGE）等电泳技术对沙田柚和酸柚花粉壁不同时间蛋白提取物进行比较分析。结果发现：（1）两者不同时间花粉壁渗出液经非变性的聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）分离，考马斯亮蓝 R-250 染液染色，都可明显分出7个区带，并且，在Ⅴ区，两者共同出现谱带A。所不同的是沙田柚5min蛋白提取液图谱中已经含有绝大部分蛋白谱带，随后，各时间提取液图谱中的蛋白谱带在此基础上于各区中或增或减；而酸柚直到提取时间为40min时，其图谱中才基本上包含有绝大部分的蛋白谱带，随后的50min、60min、3h谱带的分布就是在此基础上有增有减，并且这种增减情况主要发生在Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ与Ⅵ区间、Ⅶ区。（2）两者花粉壁蛋白经变性的聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）后都出现多条染色带，经与在同样条件下电泳的标准蛋白比较，并辅助 SPSS数理统计软件对两者的SDS-PAGE图谱分布情况进行统计分析发现沙田柚不同时间提取液中所含的主要蛋白质的分子量主要是分布于1、3、4、5等四个区间内。而酸柚花粉壁则主要含有分子量位于2、4、5等三个区间内的蛋白质。（3）两者的等电点测定结果表明，在pH8.0区域内、pH6.5～5.8、pH5.8～5.4、pH5.4～4.4之间，沙田柚与酸柚不同时间花粉壁蛋白提取液的IEF图谱都具有共同的谱带。所不同的是随着提取时间的增加，沙田柚花粉壁的碱性蛋白增加，而<WP=3>酸柚既有碱性蛋白的增加，又有酸性蛋白的增加。（4）经银染法染色后的沙田柚和酸柚花粉壁蛋白图谱，分辨率较高，可分辨出近100个蛋白质斑点。两者的蛋白质格局完全不一样，就pH值分布区域而言，沙田柚花粉壁的蛋白质斑点主要分布于pH7.2-5.8之间，而酸柚的花粉壁蛋白质斑点密集于pH8.0-6.5；pH5.4-3.95两个区域范围之间；就分子质量分布区域而言，沙田柚花粉壁的蛋白质斑点主要密集于14.4Ku～43.0Ku，而酸柚在20.1Ku～43.0Ku和31.0Ku～97.4Ku两个区域内分布有较多的蛋白质斑点。值得注意的是：沙田柚花粉壁蛋白在pH7.2～5.8范围内存在有很多小分子量的蛋白质，如a、b、c、d、e点，其中有一点e落入花柱S-糖蛋白范围内（pH6.2～9.5，MW 24KD～32KD），根据对S-核酸酶在不亲和反应中作用机制的两种假说，它们很有可能与花粉S基因产物有关。这些电泳结果表明：（1）相似性可能反映花粉中可溶性蛋白的共同性；（2）明显差异性反映了植物品种和基因的差异，可作为遗传分析的一种附属手段。此外，根据实验结果，讨论了沙田柚和酸柚花粉壁蛋白的比较及其意义，同时也探讨了花粉自交不亲和性调控的可能的作用机制。以期为解释沙田柚配子体自交不亲和——花粉S基因产物作用机制提供理论依据，为花粉S蛋白质的分离、鉴定提供理论基础。