目的黑素细胞是人体重要的功能细胞,可以抵御外界紫外线对皮肤的损伤。对黑素细胞特性的深入研究有助于理解色素障碍性疾病的发生机制以及开发新的治疗策略。与细胞实验相比,动物模型更有利于观察黑素细胞在体内的功能状态。然而现有的用于黑素细胞移植的动物模型存在一定的局限性,如移植后的黑素细胞定位异常,黑素细胞移植后观察时间较短等问题。因此,迫切需要一种稳定的移植模型来评估人黑素细胞在体内的生物学特征及长期功能维持。方法在本研究中,我们首先利用硅胶小室将新生小鼠的表真皮细胞移植至免疫缺陷小鼠的背部皮肤,建立了改良的毛囊重构模型。然后在移植后的不同时间点观察移植小鼠重构的皮肤中生长期、退行期和休止期毛囊的数量和比例,并与正常小鼠进行比较。最后,将人表皮黑素细胞和新生小鼠的表真皮细胞混合后进行共同移植,并注射抗Asialo GM1抑制免疫排斥反应,通过Masson-Fontana染色、多巴染色和免疫荧光染色观察人表皮黑素细胞在免疫缺陷小鼠体内的整合部位、功能和存活时间。结果1.通过改良的小室模型,将C57BL/6新生小鼠的5×10~6个表皮细胞和5×10~6个真皮细胞移植到裸鼠背部皮肤内,可以成功重建毛囊。移植2周时,裸鼠背部伤口已结痂,基本愈合;移植3周时,裸鼠背部移植部位已长出毛发,且随着时间的延长,毛发逐渐浓密增多。通过移植后第2周至第8周的观察发现,移植裸鼠背部皮肤重构的毛发密度与正常C57BL/6小鼠背部毛发密度接近,无显著统计学差异。2.生长期、退行期、休止期的毛囊比例同样无明显差异,毛发周期基本同步。将人表皮黑素细胞共移植后3周,在重构的毛囊和毛干中均存在Masson-Fontana阳性和多巴阳性细胞,提示这些细胞能够整合到生理性分布区域且发挥功能。利用免疫荧光染色发现毛囊中存在同时表达人特异性细胞核hNuclei及黑素细胞标记物TYRP1阳性的细胞,提示这些细胞是人源性的黑素细胞。3.移植后11周,毛囊内仍可见多巴染色和Masson-Fontana染色阳性的细胞,提示这些黑素细胞能够在免疫缺陷小鼠体内长期存活并且具有功能。结论因此,本研究建立了一个可用于长期观察人黑素细胞体内功能状态的小鼠模型,这有助于进一步研究人黑素细胞在体内的定位和迁移、复制与分化等特性,并为色素脱失性疾病的黑素细胞移植治疗提供更多参考。