乳腺癌细胞中ERα与P73α的相互关系

来源 :南昌大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:lwj2005
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目的:探讨乳腺癌细胞中ERα与P73α之间物理上及功能上的相互关系。方法:用含10%胎牛血清的DMEM进行MCF-7细胞的培养及传代。将ERα和(或)p73α质粒转染MCF-7细胞。1、用免疫共沉淀法(Co-IP)检测ERα蛋白与p73α蛋白之间的相互结合:细胞转染ERα和(或)p73α质粒16-18小时后,加入终浓度为20μM的MG-132以减少蛋白酶体对ERα蛋白或p73α蛋白的降解,MG-132孵育6小时后提取蛋白。用抗ERα的多克隆抗体结合总蛋白中的ERα抗原并用蛋白A琼脂珠子将抗原抗体复合物沉淀下来。用沉淀下来的ERα抗原抗体复合物进行SDS-PAGE电泳,转膜后用p73α的单克隆抗体进行免疫印迹分析检测复合物中抗原p73α的存在。2、采用蛋白印迹法(WB)检测ERα与p73α在蛋白表达上的相互作用:细胞转染ERα和(或)p73α质粒24小时后提取蛋白。SDS-PAG电泳,转膜,封闭,用抗ERα多隆抗体、抗p73多克隆抗体标示PVDF膜检测蛋白的表达。结果:1、经蛋白酶抑制剂MG132处理细胞后,ERα蛋白及p73α蛋白能结合成复合体。2、共转染ERα与p73α时,ERα及p73α能明显相互抑制彼此蛋白表达。结论:乳腺癌细胞中ERα及p73α能结合形成复合体并能相互抑制彼此蛋白的表达。
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