基于高通量测序分析预测羽扇豆醇与miRNA相关的抑癌路径

来源 :哈尔滨工业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:liongliong559
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三萜类化合物作为一种天然产物已被发现具有众多的生物学活性,其中,羽扇豆醇在抗癌方面被证明参与多种信号通路,包括促进肿瘤细胞凋亡、抑制细胞周期、诱导分化、敏化化疗抗性、以及抑制肿瘤细胞生成等。有研究表明羽扇豆醇调控miRNA,作为抑制肿瘤通路的前导分子,但其调控途径尚未明确。本研究以人类宫颈癌细胞为研究对象,采用高通量定量技术从三个层面,miRNA水平、转录组表达水平和蛋白组水平,根据HeLa细胞中miRNA、mRNA、蛋白质表达水平的变化,以荧光定量PCR结果为依据,探索在羽扇豆醇处理条件下,羽扇豆醇抑制HeLa细胞的分子途径,为揭示羽扇豆醇抑癌途径奠定理论与实验基础。通过GFOLD和DESeq计算分析,本研究发现在100μM羽扇豆醇处理12h的条件下,HeLa细胞中有9个显著上调的miRNA,分别为hsa-miR-1307-3p、hsa-miR-193b-3p、hsa-miR-140-3p、hsa-miR-940、hsa-miR-889-3p、hsa-miR-1307-5p、hsa-miR-1293、hsa-miR-3124-5p、hsa-miR-152-5p,和6个显著下调的miRNA,包括hsa-miR-152-3p、hsa-miR-550a-3p、hsa-miR-183-5p、hsa-miR-27a-3p、hsa-miR-182-5p、hsa-miR-99b-3p。以miRNA和相应靶标mRNA调控关系为依据,根据Diana-microT-CDS网站搜索和miRanda软件预测miRNA靶标结果与差异表达转录组和蛋白组结合分析,筛选出可以作为研究对象的hsa-miR-183-96-182基因簇和相应的预测靶标KIAA1199和PBX1,用荧光定量PCR手段验证并检测筛选出的生物标记性分子在不同时间节点、不同药物处理条件下的相对表达水平,证实KIAA1199是hsa-miR-183的靶标,PBX1是hsa-miR-182的靶标,推测hsa-miR-96与hsa-miR-182共同调控PBX1。根据已有文献结果,进一步推论羽扇豆醇抑癌通路的下游信号通路,参与的信号分子有PGRMC1、BAX、AKAP95、FADD、Wnt、Caspase家族、HOX、ERα和MEOX1等,得出羽扇豆醇抑制肿瘤细胞增殖、促进凋亡、抑制细胞迁移,并能够敏化肿瘤细胞的化疗抗性。
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