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目的:课题组前期研究表明,石油醚、二氯甲烷为有柄石韦主要的通淋利尿活性部位,因此本课题探究黔产石韦石油醚、二氯甲烷(其他研究生分离)部位利尿通淋药效物质基础;因其它部位可能出现活性关联,故除石油醚外,也对乙酸乙酯部位化合物化合物进行初步分离,并进行相关活性试验,结合课题组前期工作,初步确定黔产有柄石韦的物质基础。
方法:实验药材自然晾干粉碎后经95%乙醇提取,采用硅胶柱层析,Sepha dex LH-20,MCI,C-18柱和重结晶等方法进行分离纯化,通过理化性质并借助UV,IR,1H-NMR,13C-NMR,X-ray以及2D-NMR等波谱数据鉴定化合物结构;并对化合物进行利尿通淋药效学实验;通过课题组前期有效部位HPLC-MS及代谢通路结果进行综合分析。
结果:1.从黔产有柄石韦95%乙醇提取物中分离得到30个单体化合物,鉴定了其中25个化合物,石油醚部位19个,乙酸乙酯6个,均为以知化合物,其结构类型涉及三萜类,黄酮类,脂肪族类,甾体类和酚酸类,它们分别是里白烯(1)、22-羟基何柏烷(2)、β-谷甾醇(3)、(22E)-5α,8α-Epidioxyergosta-6,22-dien-3β-ol(4)、坝巴酸(5)、环桉烯酮(6)、泽屋萜(7)、豆甾-4-烯-3酮(8)、东北贯众醇(9)、Hopan-28,22-olide(10)、齐墩果酸(11)、22,28-环氧何柏烷(12)、环何柏烯醇(13)、环桉烯醇(14)、木栓酮(15)、(23E)-cycloart-23-ene-3β,25-diol(16)、(23E)-cycloart-23,25-ene-3β-ol(17)、cyclolau denol(18)、11-羰基-β-乙酰乳香酸(19)、绿原酸甲酯(20)、2,3’-dihydroxy prop ylpentadecanoate(21)、山奈酚(22)、柚皮素(23)、蔗糖(24),β-胡萝卜苷(25);2.其中石油醚部位的13个化合物利尿通淋活性(非标渊;评价试验)试验呈阴性;3.利尿通淋物质基础为多物质协同作用;4.进过综合评价分析:酚酸,萜类,氨基酸,糖类为利尿通淋可能的药效物质基础。
结论:从黔产有柄石韦中分离得到30个化合物,鉴定了其中25个,除了化合物里白烯(1)、β-谷甾醇(3)、环按烯醇(14)、绿原酸甲酯(20)、山奈酚(22)、蔗糖(24)、β-胡萝卜苷(25),其它18个化合物为首次从该植物中分离得到;化合物5单晶衍射结构首次报道;再现分离到罕见的环何帕烷烯醇;有柄石韦利尿通淋物质基础为多物质协同作用,包括有机小分予酸类坝巴酸:氨基酸代谢的甘氨酸;代谢为利尿通淋有效成分的柠檬酸、咖啡因、酒石酸等,或石韦中含有这些化合物及通过代谢和酶解为这些物质的前体化合物,如蔗糖等;参与能量代谢的十八个萜类化合物。
方法:实验药材自然晾干粉碎后经95%乙醇提取,采用硅胶柱层析,Sepha dex LH-20,MCI,C-18柱和重结晶等方法进行分离纯化,通过理化性质并借助UV,IR,1H-NMR,13C-NMR,X-ray以及2D-NMR等波谱数据鉴定化合物结构;并对化合物进行利尿通淋药效学实验;通过课题组前期有效部位HPLC-MS及代谢通路结果进行综合分析。
结果:1.从黔产有柄石韦95%乙醇提取物中分离得到30个单体化合物,鉴定了其中25个化合物,石油醚部位19个,乙酸乙酯6个,均为以知化合物,其结构类型涉及三萜类,黄酮类,脂肪族类,甾体类和酚酸类,它们分别是里白烯(1)、22-羟基何柏烷(2)、β-谷甾醇(3)、(22E)-5α,8α-Epidioxyergosta-6,22-dien-3β-ol(4)、坝巴酸(5)、环桉烯酮(6)、泽屋萜(7)、豆甾-4-烯-3酮(8)、东北贯众醇(9)、Hopan-28,22-olide(10)、齐墩果酸(11)、22,28-环氧何柏烷(12)、环何柏烯醇(13)、环桉烯醇(14)、木栓酮(15)、(23E)-cycloart-23-ene-3β,25-diol(16)、(23E)-cycloart-23,25-ene-3β-ol(17)、cyclolau denol(18)、11-羰基-β-乙酰乳香酸(19)、绿原酸甲酯(20)、2,3’-dihydroxy prop ylpentadecanoate(21)、山奈酚(22)、柚皮素(23)、蔗糖(24),β-胡萝卜苷(25);2.其中石油醚部位的13个化合物利尿通淋活性(非标渊;评价试验)试验呈阴性;3.利尿通淋物质基础为多物质协同作用;4.进过综合评价分析:酚酸,萜类,氨基酸,糖类为利尿通淋可能的药效物质基础。
结论:从黔产有柄石韦中分离得到30个化合物,鉴定了其中25个,除了化合物里白烯(1)、β-谷甾醇(3)、环按烯醇(14)、绿原酸甲酯(20)、山奈酚(22)、蔗糖(24)、β-胡萝卜苷(25),其它18个化合物为首次从该植物中分离得到;化合物5单晶衍射结构首次报道;再现分离到罕见的环何帕烷烯醇;有柄石韦利尿通淋物质基础为多物质协同作用,包括有机小分予酸类坝巴酸:氨基酸代谢的甘氨酸;代谢为利尿通淋有效成分的柠檬酸、咖啡因、酒石酸等,或石韦中含有这些化合物及通过代谢和酶解为这些物质的前体化合物,如蔗糖等;参与能量代谢的十八个萜类化合物。