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糖尿病是三高(高血糖、高血压、高血脂)病中的一种,属于内分泌紊乱引发的疾病,发病范围遍布全球,流行率和死亡率居高不下,而且容易引发多种并发症,导致患者“大病不愈,小病不止”,严重危害人类健康。临床上常用胰岛素或盐酸二甲双胍等化学药物进行治疗,但化学药物存在许多副作用,使用剂量不当会使人头昏心悸,而胰岛素目前只能通过注射的方式给药,存在许多安全隐患。近年来,中药现代化的兴起使人们的注意力逐渐发生转移,从天然产物中开发安全有效的降糖药物成为新的研究热点。中药黄精的降血糖活性屡被报道,因此本课题以黄精中含量丰富的多糖为研究对象,对其结构进行初步鉴定,筛选其中降糖活性最佳的纯化组分。此外,由于多糖的口服吸收较差,市场上存在的剂型不多,本课题将黄精多糖制成微胶囊并考察其降糖活性的变化。 第一章 综述 本章主要阐述了研究对象,即黄精多糖的多种药理活性及其实例。论述了中药降糖的现状和意义;同时还围绕微囊的发展和制备方法做简要介绍。在此基础上提出本课题的选题依据及思路,为论文的后续工作提供理论基础。 第二章 黄精多糖的提取分离及纯化 本章中首次采用中试设备大批量的从药材黄精中提取多糖,避免了重复提取操作,减少提取中因提取条件控制不善而引起的误差,并增大了提取率。黄精粗多糖通过大孔树脂AB-8和纤维素DEAE的纯化,依次分离得到两个单一组分:PSP-1和PSP-2。经糖含量测定表明,PSP-1和PSP-2含糖量均高达97%以上;紫外光谱表明无蛋白、核酸干扰峰;蛋白含量和糖醛酸含量测定结果表明,两种成分各自含量均在理想范围内;高效凝胶图谱显示平均分子量范围分布集中,纯度较高。以上结果说明本实验所用分离方法可靠,且纯化的黄精多糖可以作为后续研究的原料。 第三章 黄精多糖的结构鉴定 本章中对两个黄精多糖的纯化组分进行了结构鉴定。黄精多糖PSP-1的平均分子量约为15.064 kDa,由甘露糖、鼠李糖和半乳糖三种单糖组成,摩尔比为甘露糖 : 鼠李糖 : 半乳糖=32.8:7.4:9.1,主要连接方式为1→3糖苷键(58%);1→6糖苷键(24%)和1→2或1→4糖苷键(18%)。PSP-1的红外光谱结果显示其单糖残基主要为α-吡喃环,1H-NMR谱图显示其异头碳类型为α构型,与红外光谱的结果一致。PSP-1在扫描电子显微镜下呈无序片状分布,表面有卷曲、不平整且碎片较多;黄精多糖PSP-2的平均分子量约为4171.18 kDa,分子量较大,由半乳糖、葡萄糖、鼠李糖、木糖、阿拉伯糖和甘露糖六种单糖组成,其摩尔比为半乳糖 : 葡萄糖 : 鼠李糖 : 木糖 : 阿拉伯糖 : 甘露糖=46.8:1.8:1.9:0.9:1.6:1.3,主要连接方式同样为1→3糖苷键(45%);1→6糖苷键(34%)和1→2或1→4糖苷键(21%)。PSP-2的红外光谱结果显示其单糖残基中既存在α-吡喃环,也存在β-吡喃环,1H-NMR谱图也显示其异头碳可能同时存在α、β两种构型,与红外光谱的结果一致。PSP-2 在扫描电子显微镜下呈大范围堆叠的块状。 第四章 黄精多糖的降血糖活性研究 本章成功建立了由链脲佐菌素结合高脂高糖饲料诱导的 II 型糖尿病小鼠模型,模型小鼠的血糖值明显高于正常小鼠血糖值(P<0.01),并产生了胰岛素抵抗和高胰岛素血症,糖耐量水平降低。以盐酸二甲双胍、参芪降糖片为阳性药,通过考察小鼠空腹血糖值的持续变化情况、口服糖耐量、胰岛素水平及胰岛素抵抗指数,比较了黄精粗多糖及两个纯化组分PSP-1、PSP-2的降血糖活性。与模型组相比,PSP-1、PSP-2、PSP 均能有效降低糖尿病小鼠的血糖值(P< 0.01),能显著改善II型糖尿病小鼠的口服糖耐量水平(P<0.01),调节血液中胰岛素水平,并减轻其胰岛素抵抗(P<0.01)。其中黄精多糖PSP-1的降糖活性最佳,PSP-1给药组小鼠各项指标均优于粗多糖和PSP-2。 第五章 黄精多糖微胶囊的制备工艺研究及药效评价 本章采用复乳-喷雾干燥法,成功将黄精多糖实现了微囊化。以稳定性为指标考察了W/O/W型乳液的处方工艺,确定了复合乳化剂的HLB值为5.0,乳化剂添加量为14%,多糖溶液添加量为30%时,能形成最稳定的初乳液;将初乳与壁材溶液按1:4的比例混合,并控制固化物含量在20%~30%时,能制得稳定的复乳液。建立了检测微囊中多糖含量的方法,该方法精密度良好,回收率高;以载药量为考察指标,通过单因素实验考察了喷雾干燥的出风温度、进料速率和固化物含量的适宜范围,再通过Box-Behnken响应面设计法优化实验条件,拟合模型,最终确定当出风温度为166℃,进料速率为9%,固化物含量为25.695%时,载药量能达到最大值,为(85.66 ± 0.86)%,通过重复实验验证模型,真实值与预测值基本一致。本实验制得的黄精多糖微胶囊为白色粉末,流动性和分散性良好,在微观下呈球形或类球形,平均粒径为166.43μm,粒径分布均匀,体外释放度考察结果显示黄精多糖微胶囊具有良好的缓释效果。 通过对制得的黄精多糖微胶囊进行降血糖实验,发现其有良好的降血糖活性,与原料药相比,所制得的微囊降低空腹血糖值、改善糖耐量、缓解糖耐量抵抗、提高肝糖原水平的能力均有提高。